PCR (Polymerase Chain Reaction)

1. CHE COS'E'?

1.1. Tecnica di amplificazione del dna in provetta

1.1.1. Ripetizione ciclica di ricopiatura

1.1.1.1. Aumento esponenziale di 2^n

1.1.2. ATTRAVERSO

1.1.2.1. PRIMERS

1.1.2.2. TAQ POLIMERASI

1.1.2.2.1. DNA polimerasi termoresistente di "THERMOFILUS AQUATICUS"

1.1.2.3. dNATP

2. FASI DELLA REAZIONE

2.1. Avvengono a temperature diverse

2.1.1. 1. DENATURAZIONE

2.1.1.1. 94°-98°C

2.1.1.2. Separazione dei due filamenti di DNA

2.1.2. 2. ANNEALING

2.1.2.1. 50°-60°C

2.1.2.2. Utilizzo di 2 primers che si legano nei loro siti specifici

2.1.2.3. I primers si appaiano con il filamento stampo

2.1.2.4. La polimerasi si lega al DNA stampo e inizia la replicazione

2.1.3. 3. ESTENSIONE

2.1.3.1. 70°-75°C

2.1.3.2. La polimerasi aggiunge le basi all'estremità 3'

2.1.3.3. Si ottengono 2 copie di DNA a doppio filamento

2.2. Regolate da un termociclatore