1. Electroforesis
1.1. La electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida es una de las metodologías más utilizadas en el laboratorio en todo lo relacionado con el trabajo con ácidos nucleicos.
1.2. Cuando una corriente eléctrica se aplica sobre el gel de agarosa el ADN tiene una carga negativa y migra hacia el ánodo (polo positivo).
1.2.1. La agarosa es un polímero lineal de galactosa y 3,6-anhidrogalactosa. El gel se obtiene disolviendo la agarosa en un buffer de TAE o TBE y se funde usando un microondas, hasta obtener una solución homogénea y transparente.
1.2.2. Se deja enfriar para polimerizar para formar una matriz porosa variando el tamaño del poro según la concentración de agarosa contenida en la disolución.
1.2.3. Cuando el ADN se deposita en los pozos del gel debe mezclarse con un buffer de carga este permite:
1.2.4. 1) aumentar la densidad de la muestra para depositarse en el fondo del pozo 2) teñir la muestra para facilitar su carga dentro del gel 3) identificar la distancia recorrida por las muestras
2. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
2.1. Es una técnica de laboratorio utilizada para amplificar secuencias de ADN. La identificación y caracterización de estos fragmentos constituyen un procedimiento central en una gran cantidad de experimentos relacionados con la biología molecular.
2.1.1. PROTOCOLO DE REALIZACIÓN DE LA TÉCNICA
2.1.1.1. Desnaturalización: Aquí se separan o desnaturalizan las dos cadenas complementarias del ADN blanco.
2.1.1.2. Alineamiento: Consiste en el apareamiento específico entre los fragmentos iniciadores (oligonucleótidos) y las cadenas simples del ADN desnaturalizado.
2.1.1.3. Extensión: En este paso la ADN polimerasa extiende la longitud de los fragmentos iniciadores que se encuentran unidos al ADN blanco.
2.2. En medicina su valor diagnóstico es amplio. La detección de bacterias y virus es posible si se utilizan los segmentos iniciadores necesarios
2.2.1. Mediante PCR se puede revelar la presencia del HIV1 en individuos que no muestran una respuesta inmunológica eficiente ante este agente y que pueden pasar como no infectados cuando se utilizan las técnicas de inmunodiagnóstico rutinarias.