TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS

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TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS by Mind Map: TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS

1. Reacción Ag-Ab

1.1. Resultado de interacciones no covalentes

1.2. Reversible

1.3. Se lleva a cabo entre

1.3.1. Sitio activo del Ab (parátopo)

1.3.2. Determinante antigénico específico (epítopo)

1.4. Posee dos características intrínsecas

1.4.1. Afinidad

1.4.1.1. Fuerza de unión Ag-Ab individual (un sólo sitio de unión y un sólo determinante antigénico)

1.4.1.2. Es la suma de las fuerzas de atracción y repulsión (número y clase de interacciones)

1.4.2. Avidez

1.4.2.1. Fuerza de unión total de un Ag con un Ab, cuando el Ag y el Ab tienen al menos dos sitios de unión.

1.5. Existen casos en los que se dan reacciones cruzadas debido a que dos Ag comparten determinantes antigénicos o tienen similitud estructural

1.5.1. Reacciones cruzadas

1.5.1.1. Confieren protección contra patógenos a los cuales no se ha estado en contacto previamente

1.5.1.2. Son causa de falsos positivos en pruebas diagnósticas

1.5.1.3. Participan en el desarrollo de enfermedades auto-inmunitarias

1.6. Producen complejos Ag-Ab cuando la concentración es máxima y ambos reactantes están en equivalencia

2. Pruebas inmunológicas o inmuno-ensayos

2.1. Detectar la presencia de anticuerpos o de antígenos

2.2. Se basan en reacciones de

2.2.1. Precipitación

2.2.1.1. Reacción Ag-Ab

2.2.1.2. El Ag se encuentra soluble y forma un complejo Ag-Ab insoluble

2.2.1.3. Constituyen una red que precipita visiblemente en medio líquido o semisólido

2.2.1.4. Requiere una incubación de 48 horas a 37oC

2.2.2. Aglutinación

2.2.2.1. Es una reacción Ag-Ab

2.2.2.2. El Ag se encuentra particulado (eritrocitos, bacterias o partículas sintéticas) formando un complejo Ag-Ab insoluble

2.2.2.3. Constituyen una red tridimensional que aglutina visiblemente

2.2.2.4. Reacción instantánea Se lleva a cabo a temperatura ambiente

3. Zona de equivalencia

3.1. Se observa en las pruebas de precipitación y aglutinación

3.2. Su formación tiene importancia diagnóstica y clínica

4. Ensayos inmunológicos no basados en reacciones de precipitación y aglutinación, pero si en reacciones Ag-Ab

4.1. ELISA

4.1.1. Técnica en la cual uno de los reactantes, (Ab o Ag) se fija a un soporte sólido previamente a su interacción con la muestra biológica

4.1.2. Se evidencia con un Ab secundario acoplado a una enzima que posteriormente reacciona con su sustrato y produce una reacción colorida

4.1.3. La concentración del Ag o Ab problema es directamente proporcional a la intensidad del color

4.2. Inmunofluorescencia

4.2.1. Técnica basada en la reacción Ag-Ab donde el Ab esta acoplado a una molécula fluorescente

4.2.2. Se utiliza para

4.2.2.1. la detección de Ag microbianos o celulares en cortes histológicos

4.2.2.2. La detección de inmuno-complejos en las lesiones que acompañan a enfermedades auto-inmunitarias e infecciosas

4.3. Citofluorometría de flujo (FACS)

4.3.1. Esta técnica se basa en la determinación de varias características celulares en forma simultánea

4.3.2. Permite cuantificar en una mezcla en suspensión diferentes poblaciones celulares a través el uso de anticuerpos monoclonales acoplados a fluorocromos

4.3.3. Cuantifica linfocitos T CD4+ y T CD8+ , de utilidad en el seguimiento de la infección por (VIH)

4.3.4. Diagnóstico de leucemias e inmunodeficiencias primarias, secundarias y perfil inmunológico

4.4. Western-blot (WB)

4.4.1. Es una técnica que permite la identificación de proteínas en una muestra biológica

4.4.2. Consiste en tres etapas:

4.4.2.1. PRIMERA

4.4.2.1.1. Se utiliza una electroforesis para separar las proteínas (Ag) de acuerdo a su peso molecular

4.4.2.2. SEGUNDA

4.4.2.2.1. Es la transferencia de las proteínas a una membrana de soporte (PVDF)

4.4.2.3. TERCERA

4.4.2.3.1. Consiste en la identificación de Ag con el uso de Ab acoplados a una enzima, la cual al reaccionar con su sustrato cambia de color

4.4.3. Técnica empleada para el diagnóstico confirmatorio de la presencia de la infección por VIH.

4.5. Pruebas inmunológicas rápidas

4.5.1. Inmunocromatografía

4.5.1.1. Permite realizar la detección de un Ag o Ab de forma semicuantitativa a través de la acumulación de la muestra en oro coloidal conjugado con Ab o Ag adsorbidos en zonas específicas de una membrana de nitrocelulosa.

4.5.1.2. Cuando se agrega una muestra biológica, en caso de que contenga el Ag de interés ocurrirá la reacción Ag-Ab y se observará una banda colorida

4.5.1.3. Estudio que permiten evaluar el estado inmunológico de un paciente

4.6. Linfoproliferación

4.6.1. Evalúa el porcentaje y concentración en sangre periférica de linfocitos T CD3+, Th CD3+CD4+, Tc CD3+CD8+, B CD19+ y NK CD16+56+ por citometría de flujo

4.6.2. En la muestra de un individuo sano se obtiene un 30% del total de linfocitos T cultivados