1. Aplicaciones
1.1. En investigación básica
1.1.1. Metabolismo celular
1.1.2. Interacciones celulares
1.2. En investigación aplicada
1.2.1. Inmunología
1.2.2. Virología
1.2.3. Farmacología
1.2.4. Toxicología
1.2.5. Ingeniería de tejidos
1.2.6. Estudios con células madre
2. Tipos
2.1. Cultivo de órganos
2.1.1. Distintos tipos celulares
2.1.1.1. Parénquima
2.1.1.2. Mesénquima
2.1.2. No crecimiento
2.1.3. Para estudios
2.2. Cultivo de explantes
2.2.1. Crecimiento de células periféricas
2.3. Cultivo de células
2.3.1. Tipos
2.3.1.1. Primario
2.3.1.1.1. A partir de un tejido
2.3.1.2. Secundario
2.3.1.2.1. Primario
2.3.1.2.2. Secundario
2.3.1.2.3. Linea celular en congelación
3. Comportamiento biológico
3.1. Curva de crecimiento
3.1.1. Fase de latencia
3.1.2. Fase de crecimiento exponencial
3.1.3. Fase estacionaria
3.2. Formas de crecimiento
3.2.1. Depende del grado de diferenciación
3.2.1.1. ⬆Indiferenciación
3.2.2. Crecimiento en monocapa
3.2.2.1. Células dependientes de anclaje
3.2.2.2. Usado mayoritariamente
3.2.2.3. Etapas
3.2.2.3.1. Adhesión a una superficie
3.2.2.3.2. Proliferación y formación de colonias
3.2.2.3.3. Inhibición por contacto
3.2.3. Crecimiento en suspensión
3.2.3.1. Tipos de células
3.2.3.1.1. Células sanguíneas circulantes
3.2.3.1.2. Células hematopoyéticas
3.2.3.1.3. Células madre
3.2.3.1.4. Células tumorales o transformadas
3.2.3.2. Etapas
3.2.3.2.1. Adaptación al medio de cultivo
3.2.3.2.2. Proliferación en suspensión
3.2.3.2.3. Inhibición por densidad
4. Factores que intervienen
4.1. Soporte físico
4.1.1. Material
4.1.1.1. Vidrio
4.1.1.1.1. Reutilizable
4.1.1.1.2. Buena calidad óptica
4.1.1.2. Plástico desechable
4.1.1.2.1. Bajo coste
4.1.1.2.2. Calidad óptica
4.1.1.2.3. Fácil esterilización
4.1.1.2.4. Ahorro tiempo y personal
4.1.1.2.5. Menor riesgo de contaminación
4.1.1.3. Matrices tridimensionales
4.1.1.3.1. Estructura 3D porosa
4.1.1.3.2. Organización parecida a la natural
4.1.1.4. Microesferas de sephadex o poliacrilamida en suspensión
4.1.1.4.1. Células dependientes de anclaje
4.1.1.4.2. ⬆ Superficie
4.1.1.5. Metales
4.1.1.5.1. Células de la glia
4.1.2. Tipos de recipientes de cultivo
4.1.2.1. Placas multipocillo
4.1.2.1.1. Riesgo de contaminación
4.1.2.1.2. Estudios puntuales
4.1.2.2. Placas Petri
4.1.2.2.1. Riesgo de contaminación
4.1.2.2.2. Estudios puntuales
4.1.2.3. Frascos o botellas roux
4.1.2.3.1. Cultivos en monocapa y suspensión
4.1.2.3.2. Tapón con doble click
4.1.2.3.3. Portaobjetos en el interior (opcional)
4.1.2.4. Botellas para incubadores tipo roller
4.1.2.4.1. Acople a mecanismo giratorio
4.1.3. Tratamiento del soporte
4.1.3.1. Mejora el crecimiento
4.1.3.2. Anterior al cultivo o en el medio de cultivo
4.1.3.3. Proteínas de matriz extracelular
4.2. Medio de cultivo
4.2.1. Objetivos
4.2.1.1. Aporte de nutrientes y sustancias necesarias para el metabolismo celular
4.2.1.2. Mantener características fisicoquímicas
4.2.2. Composición
4.2.2.1. Sales minerales
4.2.2.1.1. Osmolaridad
4.2.2.2. Tampón
4.2.2.2.1. Mantenimiento pH 7,2-7,6
4.2.2.3. Indicador de pH
4.2.2.3.1. Se modifica con el metabolismo celular
4.2.2.4. Glucosa
4.2.2.4.1. Fuente de E
4.2.2.5. Aminoácidos
4.2.2.6. Vitaminas
4.2.2.7. Hormonas y factores de crecimiento
4.2.2.7.1. Suero animal
4.2.2.7.2. Medios definidos libres de suero
4.2.2.8. Antibióticos y antifúngicos
4.2.2.9. Agentes antiespumantes
4.2.2.9.1. Baja tensión superficial
4.3. Atmósfera gaseosa
4.3.1. O2
4.3.2. CO2
4.3.2.1. Mantenimiento pH en tampón HCO3-
4.4. Condiciones de incubación
4.4.1. Temperatura
4.4.1.1. 37 º C mamíferos
4.4.1.2. 28 º C insectos
4.4.2. Humedad
4.4.2.1. Evita evaporación medio cultivo. 95%
5. Procedimientos
5.1. Disgregación celular
5.1.1. Métodos mecánicos
5.1.1.1. Fases
5.1.1.1.1. Picar tejido y colocar sobre criba
5.1.1.1.2. Aplastar la masa de tejido
5.1.1.1.3. Colocar la criba sobre el recipiente de cultivo
5.1.1.1.4. Lavar con tampón o medio de cultivo
5.1.2. Métodos enzimáticos
5.1.2.1. tripsina, colagenasa, dispasa, papaína, elastasa y pronasa
5.1.3. Selección de células
5.1.3.1. Propiedades específica
5.1.3.2. Métodos inmunológicos
5.1.3.2.1. Recubrir pocillos con Ac específico
5.1.3.2.2. Recubrir esferas de material inerte con Ac
5.1.3.2.3. Recubrir esferas magnéticas con Ac
5.1.3.2.4. Citometria de flujo
5.2. Recuento y viabilidad celular
5.2.1. Colorante vital
5.2.1.1. Azul tripan
5.2.1.1.1. Penetra en células muertas
5.2.2. Contaje
5.2.2.1. cámara de Neubauer
5.2.2.1.1. Viables y no viables
5.3. Descongelación de células
5.3.1. Incubar vial a 37º C
5.3.2. Limpiar la S con etOH 70º
5.3.3. Traspasar a tubo falcon y añadir 10 mL de medio de cultivo
5.3.4. Centrifugar y retirar sobrenadante
5.3.4.1. Eliminación DMSO
5.3.5. Añadir medio cultivo
5.4. Inicio del cultivo. Siembra
5.4.1. Elección recipiente
5.4.2. Establecer el número de células a sembrar
5.4.3. Recuento de células viables
5.4.4. Transferir a un tubo Falcom y lavar con medio de cultivo a 37º C
5.4.5. Añadir el medio de cultivo restante y trasvasar al recipiente
5.4.6. Colocar en estufa
5.4.6.1. Control C02 y humedad
5.5. Mantenimiento del cultivo
5.5.1. Control periódico microscópico
5.5.2. Cambio de medio
5.5.2.1. Cambio pH
5.5.2.2. Cambio parcial 2/3
5.5.3. Subcultivo o pase
5.5.3.1. Cultivos en suspensión
5.5.3.1.1. Recuento viables
5.5.3.1.2. Cálculo dilución
5.5.3.2. Cultivos en monocapa
5.5.3.2.1. Despegar las células
5.6. Conservación células
5.6.1. Recuento viables
5.6.2. Eliminación medio cultivo. Centrifujación
5.6.3. Adición de suero animal con 10% DMSO
5.6.4. Alicuotar y congelar
5.6.4.1. -20 ºC
5.6.4.1.1. 24 h
5.6.4.2. -80º C
5.6.4.2.1. 48 h
5.6.4.3. N2
5.6.4.3.1. Indef
6. Contaminaciones
6.1. Bacterias, levaduras y hongos
6.1.1. Condiciones de esterilidad y asepsia
6.1.2. Precaución en ambientes no estériles
6.1.3. Limpiar cot etOH 70º
6.1.4. Cambiar agua estufa regularmente
6.1.5. Destruir cultivo contaminado
6.1.5.1. Se puede tratar con ab antes