HIDROLISIS DE SACAROSA POR INVERTASA DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE INMOVILIZADA SOBRE NANOPARTÍCULA...

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HIDROLISIS DE SACAROSA POR INVERTASA DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE INMOVILIZADA SOBRE NANOPARTÍCULAS MAGNÉTICAS DE FERRITA DE COBALTO por Mind Map: HIDROLISIS DE SACAROSA POR INVERTASA DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE INMOVILIZADA SOBRE NANOPARTÍCULAS MAGNÉTICAS DE FERRITA DE COBALTO

1. 1. MATERIALES

1.1. Sulfato de hierro heptahidratado (95.5%)

1.2. Sulfato de cobalto heptahidratado (97%)

1.3. Hidróxido de sodio (97%)

1.4. Etilenglicol

1.5. Acetato de sodio anhidro

1.6. Ácido acético

1.7. Glutaraldehído

1.8. Ácido - 3,5 -dinitrosalicílico

1.9. Tartrato de sodio y potasio

1.10. Quitosano

1.11. Enzima beta - D - fructofuranosidasa

1.12. Agua tipo l obtenida de un Q-millipore de conductividad 0.05Ms

2. 2. METODOLOGÍA

2.1. Síntesis del NPM-CoFe4O4

2.1.1. Se prepararon soluciones de 0.040M y 0.036M de CoSO4.7H2O y FeSO4.7H2O, en etilenglicol, el Ph se ajusto a 10 con el Hidróxido de sodio, la mezcla se llevo a reflujo seguido de su enfriamiento a temp. ambiente para ser filtrada por gravedad. el precipitado se seco a 120 grados celcius por dos horasy luego calcinado a 650 grados celcius por 4 horas.

2.2. Recubrimiento con Quitosano a las NPM - CoFe2O4 y activación con el glutaraldehído.

2.2.1. Se realizaron cuatro ensayos de modificación con concentraciones de 0.2 y 0.4% de quitosano y y de 1 y 2% de glutaraldehído, se pesaron las nanoparticulas de NPM - CoFe2O4 y se adicionaron a una solución al 0.2%de quitosano en ácido acético al 0.35M, para ajustar el Ph con hidróxido de sodio. finalmente se obtuvieron las nanoparticulas de NPM - CoFe2O4 recubiertas con quitosano llamadas NPM -Q.

2.3. Inmovilización de la beta - D - fructofuranosidasa sobre NPM -Q activadas.

2.3.1. Las NPM-Q fueron activadas adicionandolas a una solución de 10ml de beta - D- fructofuranosidasa al 0.2% en tampón acetato 0.1M contando con un Ph de 4.5, incubandose por 20 horas a temperatura 37 grados, se tomo una alícuota de la solución de la enzima antes de la inmovilización y otra del sobrenadante despues del tiempo de la incubación para determinar la cantidad de la beta - D fructofuranosidasa inmovilizada y el rendimiento de la in movilización, mediante el método espectrofotométrico para la cuantificación de la proteína de Bradford.

3. 3. RESULTADOS

3.1. Formación de nanocristales de ferrita de cobalto (CoFe2O4) en un 54.6%

3.2. Formación de cristales de tenardita (Na2SO4) en un 29.7%

3.3. Formación de sulfatos de SO4-2) precursoras de las sales creadas del Fe y Co, al reaccionar con el catión Na+ proveniente del Hidróxido de sodio.

3.4. Presencia de cristales de etilenglicol (C2H6O2) en un 15.7%, esto debido a la alta viscosidad cuando se somete a altas temperaturas.

3.5. Temperatura y Ph óptimos

4. 4. CONCLUSIONES

4.1. Desarrollo metodológico para la hidrólisis de la sacarosa a escala de laboratorio por medio de la in movilización de la beta-D-fructofuranosidasa permitiendo su utilización.

4.2. La beta - D - fructofuranosidasa inmovilizada sobre NPM - CoFe2O4 presento, respectivamente, en el segundo y tercer ciclo 95.89 y 91.79% de actividad enzimática retenida, no obstante, hasta el noveno reúso mantiene 50.81% de actividad.

4.3. Las NPM-BFR presentan un Ph óptimo de 5.0 y una retención de la actividad desde 50 hasta 70 grados, lo cual se debe al aumento posterior al proceso de in movilización en las fuerzas de unión entre la enzima y el soporte.

5. 5. BIBLIOGRAFÍA

5.1. Ahmad, S.: Anwar, A.: and Saleemuddin, M. 2001. Inmovilización y Establilización de la Invertasa del Cajanus Cajan Lectin Soporte. Bioresour. Technol. 79(2); 121-127.