Practica de laboratorio #4 fraccionamiento celular

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Practica de laboratorio #4 fraccionamiento celular por Mind Map: Practica de laboratorio #4 fraccionamiento celular

1. Fraccionamiento celular #1 con morteros y cuchillas

1.1. -Lave cuidadosamente con agua corriente 40 hojas de espinaca. -Con unas de estas tijeras corte 10 hojas de espinaca en fragmentos pequeños reserve los fragmentos obtenidos para cada tipo de lisis. -la lisis 1 se realiza con mortero, la lisis 2 con igual procedimiento, la lisis 3 con cuchillas

1.1.1. Mortero

1.1.1.1. -Adicionar 50 ml de la solución de lisis en el mortero junto con los fragmentos de hojas de espinaca. -Comenzar triturando las hojas por 3 minutos a temperatura ambiente. -Colocar 100 ul de la solución obtenida de la lisis en porta objetos y realice un frotis en un porta objetos. -Continuar la maceración de la muestra por otros 3 minutos y repetir los pasos 3 y 4. -Terminar la maceración de la muestra por otros 3 minutos. -Repetir los pasos 5 y 6 nuevamente.

1.1.1.1.1. Cuchillas

2. Fraccionamiento celular #2 separación e identificación de fracciones provenientes de células hepáticas

2.1. Separación y ruptura de células hepáticas: -Pesar las dos placas de Petri suministradas. -Exponer el hígado de pollo. -Cortar trozos de tejido pertenecientes al borde los lóbulos . -Colocar los trozos del tejido en una de las cápsulas de Petri conteniendo solución. -Lavar con NaCl 0.15 M frío con la ayuda de una inyectada profunda el tejido. -Eliminar los restos de la solución. -Cortar el tejido en trozos muy pequeños. -Introducir el tejido fragmentado en el homogeneizador. -Transferir el homogenato a un tubo de centrifuga plástico de 10 ml. -Lavar el homogeneizador con 1 ml de NaCl 0.15 M frío. -Medir y anotar el volumen del homogenato obtenido. -Guardar en 0.5 ml en un tubo de ensayo pequeño y rotulado, mantenga el resto del homogenato

2.1.1. Separación de fracciones mediante centrifugación. -Tomar el resto del homogenato. -Balancear dicho tubo con el de otro equipo con la ayuda del preparador. -Configurar a 5.000 xg durante 10 minutos -Separar el sobrenadaste 1 con una pipeta Pasteur. -Colocar el sobrenadante 1 en otro de centrifuga. -Centrifugar a 10.000 xg durante 20 min -Observar el tubo. -Separar el sobrenadante 2 con pipeta Pasteur -Centrifugar a 16.000 xg en 30 min -observar el tubo, separar el sobrenadante 3 y mantener todas las fracciones.

2.1.1.1. Centrifugación por gradiente discontinuo -Colocar los tubos de centrifuga con hielo en posición vertical. -Introducir 10 ml en sacaros -Agregar con otra pipeta 10 ml -Agregar 10 ml de sacaros de la misma forma.