1. MEDIOS DE CULTIVO
1.1. ¿Qué es? Mezcla de sustancias naturales o sintéticas para propiciar el crecimiento y reproducción de los microorganismos.
1.2. Clasificación:
1.2.1. Según su estado físico: Líquido o sólido
1.2.1.1. Líquido: Caldo nutritivo
1.2.1.2. Sólido: Agar
1.2.2. Según procedencia de sus constituyentes: Naturales, sintéticos o semisintéticos.
1.2.3. Según sus propósitos de uso: De enriquecimiento, selectivos, diferenciales, selectivos diferenciales.
1.2.3.1. Medio de enriquecimiento contiene sustancias que favorecen el crecimiento del microorganismo que nos interesa e inhibe el crecimiento de otros (Chocolate Agar).
1.2.3.2. Medios selectivos: Como el de enriquecimiento, pero están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos (Mac Conkey).
1.2.3.3. Medios diferenciales: No contienen sustancias inhibidoras, pero si indicadores de productos derivados del metabolismo de algunos microorganismos.
2. NIVELES DE BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS
2.1. En cada nivel se establecen normas para el manejo de organismos que puedan representar una amenaza para la salud humana.
2.1.1. Nivel de bioseguridad 1 (BSL-1). Los agentes de este nivel no representan un riesgo para el humano y solo se trabaja con prácticas estandarizadas para el trabajo de laboratorio.
2.1.2. Nivel de bioseguridad 2 (BSL-2). Se trabaja con agentes asociados con enfermedades humanas, pero no causan infecciones mortales y no se transmiten por el aire.
2.1.3. Nivel de bioseguridad 3 (BSL-3). Se trabaja con agentes nativos o exóticos que tienen potencial de ser trasmitidos por vía respiratoria y pueden causar infecciones serias y potencialmente letales.
2.1.4. Nivel de bioseguridad 4 (BSL-4). Agentes peligrosos y exóticos que poseen un alto riesgo de infección y riesgosos para la vida, y agentes infecciosos de transmisión por vía aerea y/o agentes con método de transmisión desconocida.
3. TINCIÓN DE GRAM
3.1. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas
3.1.1. Se basa en la composición de la pared celular de las bacterias:
3.1.1.1. Gram negativas: Contienen en su pared una capa fina de peptidoglucanos y una membrana celular externa.
3.1.1.2. Gram positivas: tienen una pared gruesa de peptidoglicano pero sin membrana celular externa.
3.1.2. Elementos que se utilizan.
3.1.2.1. Colorante primario: Cristal violeta (tiene afinidad con el peptidoglicano).
3.1.2.2. Lugol: sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta.
3.1.2.2.1. Complejo cristal violeta - yodo
3.1.2.3. Alcohol-acetona: para deshidratar la pared celular de la bacteria y cerrar los poros de la misma.
3.1.2.4. Safranina: Para teñir las paredes que no pudieron retener el complejo de cristal violeta-yodo.
4. DILUCIONES
4.1. Es un hecho que en la mayoría de los ambientes, la densidad microbiana suele ser demasiado elevada o baja para poder realizar una siembra directa de la muestra que de buenos resultados en la enumeración de microorganismos. Esta situación hace necesaria la dilución o la concentración de la muestra previa a la realización de cualquier estudio. Además, las muestras sólidas requieren su dilución para facilitar la manipulación y permitir trabajar con ellas como si fueran muestras líquidas.
4.1.1. Se pueden preparar diluciones:
4.1.1.1. Decimales
4.1.1.2. Sucesivas
5. TEMPERATURA Y pH
5.1. TEMPERATURA: Factor ambiental que afecta todas las relaciones bioquímicas y por lo tanto el crecimiento de los microorganismos.
5.1.1. Clasificación de acuerdo a la temperatura óptima de crecimiento.
5.1.1.1. Psicrófilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 0-20 °C. Por ejemplo, Polaromonas vacuolata, hallado en el océano Antártico, siendo su temperatura óptima es de 4 °C.
5.1.1.2. Mesófilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 20-40 °C.
5.1.1.3. Termófillos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 40-80 °C.
5.1.1.4. Hipermófilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 80-100 °C. La mayoría de estos microorganismos son arqueas como Methanococcus igneus.
5.2. pH: Cada especie crece un rango determinado de pH y tiene un pH óptimo de crecimiento.
5.2.1. Clasificación en relación al pH óptimo de crecimiento.
5.2.1.1. Acidófilas: Crecen a pH menores de 5. Por ejemplo, Sulfolobus y Thiobacillus que crece a pH 1-2 oxidando minerales de sulfuro para producir ácido sulfúrico.
5.2.1.2. Alcalófilas: Crecen a pH mayores a 9, como algunas especies de Rhizobium, bacillus y algunas bacterias entéricas.
6. FASES DE CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO
6.1. Fase lag: Representa el tiempo necesario para reiniciar el ciclo celular después de un periodo de ayuno nutrimental.
6.2. Fase exponencial: O de crecimiento balanceado, representa el periodo en el que hay suficientes nutrimentos; las bacterias recuperan el ciclo celular e incrementan su número exponencialmente.
6.3. Fase estacionaria: Representa el periodo de crecimiento nulo. Se define operacionalmente como el momento en el que el número de células en el cultivo no varía.
6.4. Fase de muerte: Lisis celular, la muerte se produce logarítmicamente.
7. MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN FÍSICOS Y QUÍMICOS
7.1. Físicos
7.1.1. Calor
7.1.1.1. Calor seco
7.1.1.2. Calor húmedo
7.1.2. Filtración
7.1.3. Radiaciones
7.1.3.1. Rayos gamma
7.2. Químicos
7.2.1. Gases
7.2.1.1. Óxido de etileno: mezcla y puro
7.2.1.2. Péroxido de hidrógeno: plasma y vaporizado.
7.2.1.3. Formaldehído
7.2.1.4. Ácido perácetico (plasma)
7.2.2. Líquidos
7.2.2.1. Ácido perácetico
7.2.2.2. Glutaraldehído