1.1. La mayoría de las técnicas utilizadas para la introducción de ADN exógeno en células producen una integración aleatoria en el genoma celular del ADN introducido. La técnica de “gene targeting” genera una modificación genética dirigida, específica y controlada, basada en la introducción o en la eliminación de ADN en lugares precisos del genoma, utilizando la recombinación homóloga de esas secuencias de ADN foráneas con los genes autóctonos. Esta técnica requiere la utilización de células madre embrionarias (ES “cells”, “embrionic stem cells”), que son pluripotentes y que, una vez modificadas genéticamente, son inyectadas en blastocistos para generar individuos mosaico o quimeras, es decir que contiene poblaciones celulares que proceden de individuos genéticamente distintos, bien sean de la misma especie o de otra diferente.
1.2. “Knockouts” o “knockins” específicos de tejido. En ellos la modificación sólo se expresa en los tejidos de interés, utilizando promotores específicos de tejido (por ejemplo que el gen se exprese en hígado y no en adipocitos). “Knockouts” o “knockins” condicionales o inducibles. En ellos se controla el momento de la expresión de la modificación genética. Por ejemplo, una vez que el animal ya haya nacido, con lo que se evita la posible muerte embrionaria.
1.3. Los científicos Mario R. Capecchi [EE UU], Martin J. Evans [Reino Unido] y Oliver Smithies [EE UU] han recibido el Premio Nobel de Fisiología o Medicina por el descubrimiento del procedimiento para generar estirpes de ratones en las que un determinado gen es modificado gracias al uso de células madre embrionarias. En la actualidad, se dispone de versiones de ratones knockout de unos 10.000 genes, de las que unas 500 constituyen modelos animales de enfermedades humanas.
2. RATONES TRANSGENICOS
2.1. La transgenesis es un procedimiento biotecnologico por el que se introduce un gen y en el genoma de un ser vivo. Los ratones fueron los primeros animales en ellos que se consiguio la transgen. En 1981 gordon y pudde demostraron la investigacion y transmision estables de genes inyectadosb en pronucleos de cigotos de raton obteniendo por fecundacion in vitro.En 1982 palniter y col obtuvieron ratones transgenicos gigantes cuando el transgen introduciendo , codificabrecimiento la hormona del crecimiento era de origen humano. Un transgen es construccion de ADN que codificaba una proteina especifica que es la mejora genetica deseada se han desarrollado los transgenes genomias basados en cromosomas artificiales de levadura y bacterias que son capaces de transportar grandes fragmentos de DNA en los que pueden incluir todos los elementos regulares de gen. Las tecnicas que utilizan para produccion de animales sonb los siguientes :
2.2. Microinyección pronuclear de transgenes en pronúcleos de óvulos fertilizados (cigotos). Vectores virales, que transfectan las células integrando en ellas su genoma previamente modificado (virus recombinantes). Transferencia de DNA exógeno mediada por esperma durante la fertilización (SMGT, “spermmediated gene transfer“). Inyección, en la cavidad de blastocistos, de células madre embrionarias (ES “cells”, “embrionic stem cells”) y/o células germinales embrionarias (EG, embrionic germ cells”), previamente modificadas genéticamente mediante la técnica de “gene targeting”. Transferencia nuclear (NT, “nuclear transfer”) con células somáticas, ES o EG que previamente han sido modificadas genéticamentE.
