1. Etapas envolvidas em um experimento, com um vetor viral
1.1. 1. Isolamento do gene 2. construção de um vetor 3. transferência para células no tecido - alvo 4. a produção de proteína codificada e expressa pelo gene terapêutico nessas células.
1.1.1. 1. um gene é uma porção de DNA que contém informação necessária para sintetizar uma proteína. Identificar o gene responsável pela enfermidade, e depois através de técnicas de biologia adquirir o fragmento de DNA que contém este gene.
1.1.1.1. 2. Para modificar ou inserir o gene no paciente é necessário o uso de métodos seguros e eficientes,chamados vetores. Um vetor ideal deve possuir as seguintes características: - Ser de fácil produção; - não imunogênico; - não tóxico - se possível, ter especificidade no tecido alvo. - capacidade de acomodação de um transgene de tamanho ilimitado e; - deve promover a expressão do transgene de modo eficiente e por longo tempo. 3 classes de vetores: - plasmídeos : é uma molécula de DNA circular purificada,contém alem do gene terapêutico de interesse, sequências regulatórias, promotores e intensificadores. - vetores virais: microrganismos especializados exatamente em invadir células e nelas introduzir material genético. Seu ciclo de vida consiste na liberação do ácido nucléico viral na célula hospedeira. - vetores nanoestruturados: Vesículas de lipídeos contendo DNA, capazes de fundir com a membrana das células, liberando seu conteúdo no interior delas.
1.1.1.1.1. 3. Para a introdução de genes em organismos através de terapia gênica,duas estratégias básicas podem ser utilizadas: in vivo e ex vivo. Ex vivo: - coleta e cultivo in vitro das células do paciente; - transdução com vetor carregando o gene terapêutico; - seleção e expansão das células com gene terapêutico; - reintrodução das células modificadas no paciente. In vivo: - formulação apropriada do vetor que carrega o gene terapêutico; - injeção direta do vetor no tecido - alvo do paciente.
2. CÉLULAS ALVO Aquelas que receberão o gene terapêutico> natureza da doença; _ Ex: hemofilia: correção dos níveis de fator da coagulação no sangue.
2.1. Células hematopoiéticas: principal alvo pois já possuem protocolos bem estabelecidos ( transplante de médula óssea). Células musculares: muito utilizado para terapia in vivo, unica injeção permite a expressão do gene e a liberação das proteínas na circulação pela vascularização muscular. Células hepáticas: transferência ex vivo não muito utilizados, células se dividem poucas vezes, sem protocolo, já terapia in vivo apresenta resultado satisfatório. Células epiteliais: fibroblasto possui grande potencial, células de fácil obtenção e cultura.
3. RISCO X BENEFÍCIO
3.1. Dentre as centenas de ensaios clínicos de terapia gênica já encerrados, a maioria destinou - se a testar a segurança do procedimento. Efeitos adversos mais comum: _ dor ou inflamação leve no local da injeção; _ febre baixa transitória _ dor de cabeça passageira _ sintomas semelhantes a gripe No entanto, os efeito adversos podem ser muito severos ou, em raros casos, fatais.
4. tratamento de uma doença baseada na transferência de material genético com o objetivo de amenizar ou curar uma doença.
4.1. Na teoria> adição, substituição ou inibição dos genes.
5. Pode ser utilizada para: vacinas terapêuticas (terapia gênica); controlar infecções crônicas ou doenças degenerativas.
5.1. - Nem todas as células do corpo podem ser modificadas e algumas são de difícil acesso; - nem todas as células podem ser cultivadas com sucesso (pulmão, fígado) - Alguns vetores infectam apenas selecionados tipos de células, ou não tem seletividade para infecção e inserem o DNA onde não deve.
5.1.1. - Resposta imune inadequada; - toxicidade; - transformação maligna; integração as células germinativas.
6. APLICAÇÕES DA TERAPIA GÊNICA
6.1. DOENÇA DE PARKINSON _ É um exemplo de doenças multifatoriais que podem ser tratadas com terapia gênica; _ terapias celulares de reposição de neurônios dopaminérgicos na substância negra poderão surtir efeito. Estratégias de terapia gênica incluem: _ produção local de dopamina _ ofertas de fatores para reduzir a perda progressiva dos neurônios.
6.1.1. HEMOFILIA genes responsáveis pela síntese de um dos fatores de coagulação. Fator VIII - hemofilia A Fator IX - hemofilia B _ introduzir o gene sadio em células do paciente, para que passem a produzir a proteína necessária.
6.1.1.1. CÂNCER _ Foco da maioria dos ensaios clínicos de terapia gênica; _ efeito desejável de qualquer tratamento contra câncer: provoca morte seletiva das células tumorais _ Quimioterapia - efeitos adversos graves ( devido a renovação contínua das células do sangue a partir de precursores da medula óssea) _ tratamento desejável e atingir apenas as células tumorais.