1. 1. Inocular os meios de Rappaport v. e Tetrationato através de estriamento.
1.1. 4º Plaqueamento seletivo e diferencial
2. 1. Fazer a higiene pessoal e vestir-se adequadamente
2.1. 1º Ao chegar no laboratório
3. 3. Organizar o material que será utilizado
4. 2. Fazer a limpeza da bancada com álcool 70%
5. 1. Pesar 25g da amostra e colocar em 225ml água peptonada tamponada ou caldo lactosado;
5.1. 2º Pré-enriquecimento
6. 2. Incubar a amostra em condições não seletivas, 35o por 24h;
7. 1. Usar dois meios seletivos diferentes: Rappaport Vassiliadis e caldo Tetrationato
7.1. 3º Enriquecimento seletivo
8. 2. Pegar 0,1ml de cultura do pré-enriquecimento e adicionar em cada um deles.
9. 2. - Incubar as placas 35-36 graus por 24h.
10. 3. Utilizar Agar BPLS ou XLD (ou outros) nas placas.
11. 3. Incubar o tetrationato a 37 graus por 24h e o Rappaport vassiliadis a 41,5 graus por 24h.
12. ÁGAR BPLS: as colônias de Salmonella são rosas, rodeadas por uma zona vermelha = lactose e sacarose negativo (não fermenta lactose nem sacarose): Salmonella.
12.1. 5º Observar aparência das colônias - ÁGAR BPLS
13. Crescimento de colônias amarelo-esverdeadas rodeadas por zona amarelada (fermenta lactose e sacarose, baixa o ph e muda a coloração) = lactose ou sacarose positivas: E. coli, Citrobacter, Proteus vulgaris, Klebsiella e outras.
14. ÁGAR XLD (com extrato de levedura e NaCl): as colônias de salmonella produzem ácido sulfírico e ficam escuras (pretas).
14.1. 6º Observar aparência das colônias - ÁGAR XLD
15. 1. Escolher cinco colônias típicas, bem isoladas e passar para ágar BHI e incubar a 35o por 24h.
15.1. 7º Isolamento
16. Testes bioquímicos para confirmação de Salmonella 1- Triagem bioquímica: TSI, LIA e UREIA 2- Testes bioquímicos: Indol, VMVP, Citrato, Motilidade, Malonato e Dulcitol.
16.1. 8º Testes bioquímicos
17. 1. Prova de soroaglutinação: colocar água destilada estéril em placa de Petri com um pouco da cultura do BHI e fazer espalhamento.
17.1. 9º Teste sorológico
18. 2. Pingar o soro, mexer delicadamente e observar a formação de grumos. Se houver formação de grumos, confirma-se presença de Salmonella spp. e o lote deve ser DESCARTADO.
