PRINCIPIOS DE IMUNODIAGNÓSTICO

1. TECNICAS ESPECIFICAS

1.1. AGLUTINAÇÃO DIRETA: partículas antigênicas insolúveis em sua forma íntegra ou fragmentada, são realizadas diluições seriadas do anticorpo em relação a uma quantidade constante do antígeno. Após incubação, a aglutinação se completa e o resultado é geralmente expresso com a máxima diluição em que ocorre a aglutinação. EX: tipagem sanguínea.

1.2. AGLUTINAÇÃO INDIRETA: Adsorção de anticorpos/antígenos solúveis na superfície de micropartículas inertes que não interferem na interação antígeno-anticorpo; Ex: látex.

1.3. REAÇÃO DE INIBIÇÃO DE AGLUTINAÇÃO: São baseadas na competição entre antígenos particulados e solúveis por um número limitado de sítios combinatórios em moléculas de anticorpos. Indicador de reação positiva.

1.4. TESTE DE COOMBS DIRETO: utilizado na pesquisa de auto-anticorpos já fixados na superficie das hemácias

1.5. TESTE DE COOMBS INDIRETO: pesquisa a presença de anticorpos incompletos ou imunes presentes no soro.

1.6. PRECIPITAÇÃO: combinação de antígeno solúvel com anticorpo solúvel para produzir complexos insolúveis que são visíveis. Detecção de imunoglobulinas do soro humano.

1.7. IMUNODIFUSÃO RADIAL SIMPLES: o anticorpo é distribuído no gel e o antígeno/amostra teste é aplicado em um orifício. A amostra teste difunde no gel e forma um halo de precipitação em torno do orifício

1.8. IMUNODIFUSÃO RADIAL DUPLA: um antígeno desconhecido e moléculas de um anticorpo poliespecífico são colocados em um meio suporte, os reagentes se encontram e pode ser visualizado como uma linha ou banda de precipitação.

1.9. ELETROFORESE: Separação de proteínas séricas em campos elétricos. Partículas carregadas migram em um solvente condutor sob influencia de um campo elétrico. O movimento das moléculas depende da sua carga, que e por sua vez determinada pelo pH do suporte. Como as moléculas de proteínas se tornam ionizadas, migram ao eletrodo com carga oposta.

1.10. IMUNOELETROFORESE: primeiro envolve a separação eletroforetica das proteínas, depoid imunodifusao de cada componente, a partir do seu centro de difusão, contra o anti-soro especifico, formando uma linha ou arco de precipitação na região de equivalência.

2. TECNICAS ENVOLVENDO A DISPERSÃO DE LUZ

2.1. IMUNONEFELOMETRIA: quantifica as reações de precipitação entre antígenos e anticorpos.

2.2. IMUNOTURBIDIMETRIA: mede o quanto a solução antígeno-anticorpo absorve a luz e o quanto ela deixa passar

3. ENSAIOS COM MARCADORESRADIOATIVOS

3.1. RADIOIMUNOENSAIO: um reagente marcado Ag ou Ac para quantificar o antígeno ou o anticorpo da amostra. O composto será determinado pela medida da radioatividade emitida

4. VANTAGEM: Baixo custo, rápido e simples.

5. FINALIDADES: diferenciar fases da doença, diagnóstico de alergias, doenças autoimunes e imunodeficiências congênitas, selecionar doadores de sangue, doadores para enxertos, realizar dosagens hormonais, prognóstico da doença e pesquisa de antígenos em células ou tecidos.

6. ENSAIO COM MARCADORES ENZIMATICOS

6.1. ENZIMAIMUNOENSAIOS: interação entre enzima e substrato que gera a mudança de cor, pode ser tanto qualitativo: positivo ou negativo quanto quantitativo: utiliza-se equipamentos como espectofotômetro ou mede a concentração do antígeno ou anticorpo

6.2. ELISA: utilizamos a agarose, poliacrilamida na fase solida, a enzima peroxidase e o substrato de peroxido de hidrogenio, podemos assim Medir a concentração de antigeno ou anticorpo.

7. ENSAIOS LITICOS

7.1. REAÇÃO DE FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO: A presença de anticorpo IgM ou IgG no soro do paciente e detecta através da utilização de Antígeno específico, Proteínas do complemento e Eritrócitos

8. ENSAIOS COM MARCADORES FLUORESCENTES

8.1. FLUOROCROMO/FLUOROFORO:é uma substancia que absorve luz de comprimento de onda menor e emite luz de comprimento de onda maior, conhecido como fluorescência.

8.2. REAÇÃO DE IMUNOFLUORESCENCIA DIRETA:detecção direta de antígenos usando anticorpo antigeno-especifico marcado com fluorocromo

8.3. REAÇÃO DE IMUNOFLUORESCENCIA INDIRETA: Detecção de anticorpos reativos no soro do paciente utilizando um segundo anticorpo anti-Ig marcado com fluorocromo fixado em uma lamina de microscopia.

8.4. CITOMETRIA DE FLUXO: identificacao de antígenos em células vivas. Quando uma suspensão de células marcadas é colocada em um separador de células ativado por fluorescência (FACS), o aparelho determina a intensidade da fluorescência de cada célula. As células são separadas conforme sua emissão fluorescente

9. ENSAIO DE IMUNOHISTOQUIMICA

9.1. REAÇÃO DE IMUNOPEROXIDASE: marcado a enzima peroxidase que reage com o seu substrato gerando uma cor que pode ser visualizada no microscópio onde a presença de anticorpo é identificada

10. IMUNOCROMATOGRAFIA

10.1. TESTE RÁPIDO: detecção de antígenos/anticorpos fixados na linha de captura e como conjugado um segundo anticorpo conjugado ao corante, revelando a interação antígeno-anticorpo. Apresenta sensibilidade e especificidade similar ao ELISA

11. CONCEITO: Os testes são feitos com o intuito de detectar antígenos ou anticorpos.