BANDAS O DIMEROS DE IMPRIMACIÓN INESPECÍFICOS

1. Tiempos y temperaturas de los ciclos

1.1. Demasiados ciclos de PCR, incrementa errores inespecíficos.

1.1.1. Utilizar de 20 - 35 ciclos

1.2. Tiempos largo

1.2.1. Extensión

1.2.1.1. Amplificación inespecífica, usar 1 min / kb

1.2.2. Recocido

1.2.2.1. Aumento del cebador espurio, usar 30 seg.

1.3. Temperatura baja

1.3.1. Cebadores se unen de manera incorrecta a la plantilla, usar temperatura de 5 °C más bajo Tm del cebador.

1.3.1.1. Calcular Tm

1.3.1.1.1. Calcular bien la concentración de imprimación

1.4. Velocidad de rampa del termociclador

1.4.1. Se disminuye T°, produciendo un recalentado falso

1.4.1.1. Aumentar la velocidad de la rampa

2. Componentes de la PCR

2.1. Concentraciones

2.1.1. Cebadores

2.1.1.1. Impurezas

2.1.1.1.1. inhibición de la PCR.

2.1.1.2. Alta

2.1.1.2.1. Unión de cebadores a sitio erróneos en la plantilla o entre sí.

2.1.1.3. Mal diseñados o sintetizados

2.1.1.3.1. Amplificación de pseudogenes o cebar regiones indeseadas

2.1.2. dNTP

2.1.2.1. Impuros

2.1.2.1.1. Amplificación incorrecta o inhibición del proceso de PCR

2.1.3. Mg ++

2.1.3.1. Alta

2.1.3.1.1. Aumenta la probabilidad de errores de unión y productos no deseados.

2.1.4. Agua impura

2.1.4.1. Contaminada por pipeteo.

2.1.4.1.1. Usar agua sin nucleasas