1. Corte
1.1. Obter secções finas do tecido para análise microscópica.
1.1.1. Método: Uso de micrótomo para produzir cortes de aprox. 4-5 micrômetros.
2. Montagem em Lâminas
2.1. Colocar os cortes de tecido em lâminas de vidro.
2.1.1. Método: Os cortes são flutuados em banho-maria morno e, depois, transferidos para as lâminas.
3. Remoção da Parafina
3.1. : Preparar o tecido para a coloração.
3.1.1. Método: Imersão das lâminas em xilol para remover a parafina.
4. Reidratação
4.1. Reintroduzir a água no tecido para permitir a coloração.
4.1.1. Método: Passagem das lâminas por uma série de soluções alcoólicas de concentração decrescente até água.
5. Coloração com Hematoxilina
5.1. Corar os núcleos das células, tornando-os visíveis.
5.1.1. Método: Imersão em solução de hematoxilina, seguida por lavagem com água e diferenciação.
6. Coloração com Eosina
6.1. : Corar as estruturas citoplasmáticas e extracelulares.
6.1.1. Método: Imersão em solução de eosina, seguida por lavagem.
7. Clareamento Final
7.1. Preparar para a montagem permanente.
7.1.1. Método: Imersão em xilol.
8. Fixação
8.1. Preservar a morfologia e composição química do tecido.
8.1.1. Método: Imersão do tecido em formaldeído ou outro fixador adequado.
9. Desidratação
9.1. Remover a água do tecido, preparando-o para a impregnação em parafina.
9.1.1. Método: Utilização de uma série de soluções alcoólicas de concentração crescente (geralmente etanol).
10. Clareamento
10.1. Substituir o álcool por um agente clareador que seja miscível com parafina.
10.1.1. Método: Uso de xilol ou outros solventes orgânicos.
11. Imersão em Parafina
11.1. Infiltrar o tecido com parafina para permitir o corte fino.
11.1.1. Método: Mergulho do tecido em parafina aquecida até a completa impregnação.
12. Inclusão
12.1. Posicionar e moldar o tecido em blocos sólidos de parafina.
12.1.1. Método: O tecido impregnado é colocado em moldes com parafina líquida, que é então solidificada.
13. Descoloração e Bluing
13.1. Ajustar a tonalidade dos núcleos.
13.1.1. Método: Tratamento com solução alcalina fraca (como água amoniacal) para desenvolver a cor azul.
14. Desidratação Final
14.1. Remover a água antes da montagem final.
14.1.1. Método: Repassagem por soluções alcoólicas de concentração crescente.
15. Montagem
15.1. Proteger e preservar o tecido colorido para análise.
15.1.1. Método: Cobertura com lamínula utilizando bálsamo do Canadá ou resina sintética.