HIDROLISIS DE SACAROSA POR INVERTASA DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE INMOVILIZADA SOBRE NANOPARTÍCULA...
1. 1. MATERIALES
1.1. Sulfato de hierro heptahidratado (95.5%)
1.2. Sulfato de cobalto heptahidratado (97%)
1.3. Hidróxido de sodio (97%)
1.4. Etilenglicol
1.5. Acetato de sodio anhidro
1.6. Ácido acético
1.7. Glutaraldehído
1.8. Ácido - 3,5 -dinitrosalicílico
1.9. Tartrato de sodio y potasio
1.10. Quitosano
1.11. Enzima beta - D - fructofuranosidasa
1.12. Agua tipo l obtenida de un Q-millipore de conductividad 0.05Ms
2. 4. CONCLUSIONES
2.1. Desarrollo metodológico para la hidrólisis de la sacarosa a escala de laboratorio por medio de la in movilización de la beta-D-fructofuranosidasa permitiendo su utilización.
2.2. La beta - D - fructofuranosidasa inmovilizada sobre NPM - CoFe2O4 presento, respectivamente, en el segundo y tercer ciclo 95.89 y 91.79% de actividad enzimática retenida, no obstante, hasta el noveno reúso mantiene 50.81% de actividad.
2.3. Las NPM-BFR presentan un Ph óptimo de 5.0 y una retención de la actividad desde 50 hasta 70 grados, lo cual se debe al aumento posterior al proceso de in movilización en las fuerzas de unión entre la enzima y el soporte.
3. 5. BIBLIOGRAFÍA
3.1. Ahmad, S.: Anwar, A.: and Saleemuddin, M. 2001. Inmovilización y Establilización de la Invertasa del Cajanus Cajan Lectin Soporte. Bioresour. Technol. 79(2); 121-127.
4. 2. METODOLOGÍA
4.1. Síntesis del NPM-CoFe4O4
4.1.1. Se prepararon soluciones de 0.040M y 0.036M de CoSO4.7H2O y FeSO4.7H2O, en etilenglicol, el Ph se ajusto a 10 con el Hidróxido de sodio, la mezcla se llevo a reflujo seguido de su enfriamiento a temp. ambiente para ser filtrada por gravedad. el precipitado se seco a 120 grados celcius por dos horasy luego calcinado a 650 grados celcius por 4 horas.
4.2. Recubrimiento con Quitosano a las NPM - CoFe2O4 y activación con el glutaraldehído.
4.2.1. Se realizaron cuatro ensayos de modificación con concentraciones de 0.2 y 0.4% de quitosano y y de 1 y 2% de glutaraldehído, se pesaron las nanoparticulas de NPM - CoFe2O4 y se adicionaron a una solución al 0.2%de quitosano en ácido acético al 0.35M, para ajustar el Ph con hidróxido de sodio. finalmente se obtuvieron las nanoparticulas de NPM - CoFe2O4 recubiertas con quitosano llamadas NPM -Q.
4.3. Inmovilización de la beta - D - fructofuranosidasa sobre NPM -Q activadas.
4.3.1. Las NPM-Q fueron activadas adicionandolas a una solución de 10ml de beta - D- fructofuranosidasa al 0.2% en tampón acetato 0.1M contando con un Ph de 4.5, incubandose por 20 horas a temperatura 37 grados, se tomo una alícuota de la solución de la enzima antes de la inmovilización y otra del sobrenadante despues del tiempo de la incubación para determinar la cantidad de la beta - D fructofuranosidasa inmovilizada y el rendimiento de la in movilización, mediante el método espectrofotométrico para la cuantificación de la proteína de Bradford.