Análise Bacillus Cereus

1. 2. Fazer a limpeza da bancada com álcool 70%

2. 3. Organizar o material que será utilizado

3. 1. Fazer a higiene pessoal e vestir-se adequadamente

3.1. 1º Ao chegar no laboratório

4. 1. Fazer desinfecção da embalagem com álcool 70

4.1. 2º Pesagem das amostras na câmara de fluxo laminar

5. 2. Pesar 25g da amostra num bécker com saqueta esterilizada dentro

6. 3. Adicionar 225ml água peptonada 0,1% para a primeira diluição

7. 4. Homogeneizar a amostra num homogeneizador de saquetas (BagMixer)

8. 5. Pipetar 1ml da mistura homogeneizada com uma ponteira diferente para cada tubo (10-2, 10-3, 10-4) e homogeneizar cada um deles

9. 6. Colocar as diluições em placas já identificadas, em duplicata, trocando as ponteiras para cada solução e espalhar com a alça de drigalski.

10. 1. Adicionar 0,1ml do diluído sobre cada placa de MYP (agar manitol gema de ovo polimixina) já identificadas.

10.1. 3º Plaqueamento em superfície

11. 2. Trocar as ponteiras a cada solução e espalhar com a alça de drigalski.

12. 1. Incubar a 30º-32º por 24h-48h.

12.1. 4º Incubação

13. 1. Observar a formação de alo transparente ao redor da colônia e fazer a contagem. Selecionar placas que contenham entre 10 e 100 colônias.

13.1. 5º Contagem de colônias

14. 1. Somar as duas placas e calcular a média e aplicar o equação A x 10 x 10^2 x (porcentagem de colônias positivas) = B x 10^4 UFC/g.

14.1. 6º Cálculo

15. 1. Se necessário, realizar testes bioquímicos para identificação (hidrólise de amido, hidrólise de gelatina, redução de nitrato, voges-proskauer, fermentação da glicose em anaerobiose, motilidade, decomposição da tirosina, teste de resistência a lisozima, coloração de endósporos).

15.1. 7º Testes adicionais

16. 1. Observar as características das colônias: colônias de B. cereus devem ser grandes e secas, com a parte inferior rosa avermelhada, cercadas por uma coroa precipitada bem visível.

16.1. 5º Observação das colônias

17. 2. Caso der positivo para B. cereus no agar MYP, escolher 5 culturas para fazer o teste no agar sangue (AS).

18. 1. Estriar em agar sangue (AS) e incubar por 24h a 30-32º.

18.1. 6º Teste em agar sangue

19. Exemplo: das 5 colônias testadas, 2 deram positivo = 40%+. Placas com 12 e 14 colônias, média = 13 13 x 10 x 10^2 x 0,4 = 5,2 x 10^4 UFC/g.