Técnicas laboratoriais de biologia molecular

1. Materiais

1.1. • Tubos (armazenar amostras) • Pisseta • Almofariz e Pistilo (trituração e maceração)

2. Vidrarias

2.1. • Béquer (oferece medidas pouco precisas) • Balão de fundo chato (possue volume preciso, quando calibrado) • Balão de fundo redondo • Erlenmeyer • Proveta (transferência de líquidos, ou medição com baixa precisão) • Funil de vidro • Bastão ou baqueta (agitar e facilitar dissoluções) • Placa de Petri (utilizada para cultura de bactérias)

3. Western Blotting

3.1. Método para detecção de proteínas em uma amostra com base na ligação antígeno-anticorpo

3.2. Transferência das proteínas de um gel para uma membrana adsorvente (nitrocelulose). A membrana é coloca sobre o gel, e partir de uma corrente elétrica, as proteínas que contém carga se movem do gel para a membrana mantendo a mesma posição

3.2.1. Este anticorpo se liga diretamente à proteína. Esta reação é exposta a um anticorpo secundário ligado a uma enzima, que gera uma mudança de coloração.

3.3. É feito um bloqueio de ligações interespecíficas de proteínas indesejáveis e em seguida é feito a adição dos anticorpos para detecção da proteína específica.

4. Equipamentos

4.1. • Balança de precisão (medir massas de regentes e compostos) • agitador/aquecedor magnético (aquecer e agitar soluções) • Bureta (controle de fluxo de líquidos) • Cabine de fluxo laminar • Capela (dissipar gases nocivos) • dessecador (secagem e desumidificação) • pHmetro (mede o pH das soluções) • Micropipeta (transferência de pequenos volumes) • Bico de busen (aquecimento e esterilização) • Autoclave (esterilização por calor úmido) • Agitador vórtex (agitação de líquido) • centrífuga (separação de amostras por meio da densidade) • Microscópio • Destilador de água • Estufa • Estufa incubadora Shaker

5. Eletroforese

5.1. Processo analítico de separação de proteínas de outras moléculas, por meio de um campo elétrico

5.2. Método simples e rápido, que separa as proteínas pelo tamanho

5.3. O experimento é feito em gel de poliacrilamida (PAGE), em um capo elétrico de pH e as moléculas são atraídas para o polo positivo e repetidas do polo negativo