1. processo mais simples
2. utiliza-se células cultivadas que podem ser
2.1. bacterianas
2.1.1. E coli
2.1.1.1. replicação a cada 30 minutos
2.2. mamífero
2.2.1. células CHO
2.2.1.1. replicação em 24/36 horas
3. os biofármacos também passam por processos finais
3.1. liofilização
3.1.1. remoção do solvente
3.2. cristalização
3.2.1. promove a estocagem estável da biomolécula
3.3. adsorção
4. necessário inativação viral no processo inicial
4.1. realizada utilizando-se pH baixo ou detergentes
4.1.1. contaminantes se tornam não infecciosos
5. pode ocorrer em 4 etapas
6. se o produto de interesse se encontra no interior da célula
6.1. necessário rompimento celular
6.1.1. pode ocorrer de 3 formas
6.1.1.1. homogeinização
6.1.1.2. ultrassom
6.1.1.3. rompimento enzimático/químico
7. recuperação inicial ou clarificação
7.1. separação das células do líquido
7.1.1. remove células suspensas constituídas por fragmentos e células íntegras
7.1.1.1. os métodos mais utilizados são:
7.1.1.1.1. filtração
7.1.1.1.2. centrifugação
8. remove maioria dos contaminantes
8.1. pode ocorrer por:
8.1.1. precipitação
8.1.2. extração em sistemas de duas fases
8.1.3. ultrafiltração
9. também remove a maioria dos contaminantes
9.1. pode ocorrer por:
9.1.1. cromatografia
9.1.1.1. troca iônica
9.1.1.1.1. carga total da proteína
9.1.1.2. afinidade
9.1.1.2.1. ocorre por interações específicas entre um ligante presente na fase estacionária da coluna e molécula de interesse
9.1.1.3. hidrofóbica
9.1.1.3.1. matriz de moléculas hidrofóbicas, usa-se solução salina
9.1.1.4. exclusão molecular
9.1.1.4.1. separação por tamanho
10. purificação
10.1. baixa resolução
10.2. alta resolução
11. processo de PURIFICAÇÃO de uma macromolécula alvo
11.1. utiliza-se colunas cromatográficas
11.1.1. pequenas
11.1.1.1. escala laboratorial
11.1.2. grandes
11.1.2.1. escala industrial
12. biofármacos de administração parenteral necessitam graus de pureza > 99%
13. polimento
13.1. elimina contaminantes específicos
13.1.1. comumente ocorre por:
13.1.1.1. cromatografia
13.1.1.2. filtração
13.1.1.2.1. microfiltração
13.1.1.2.2. ultrafiltração
13.1.1.2.3. nanofiltração
13.1.1.2.4. filtração esterilizante
14. a escolha de processos depende de alguns fatores, como a característica da molécula, sua finalidade e impurezas presentes em seu processamento
14.1. métodos de separação devem ser escolhidos conforme princípios físicos
14.2. deve-se remover contaminantes não relacionados ao produto final
14.2.1. garantia de qualidade e BPF