Reacción en cadena de la polimeraza PCR

1. Funciones de proteínas involucradas

1.1. Identification del sitio de origen de replicaron

1.2. Desenrollamiento de la doble hélice

1.3. Estabilizacion de cadenas desenrolladas

1.4. Iniciador para el ADN polimeraza

1.5. Pasos finales en ensamblaje de dos cadenas

1.6. Identificación de sitios de terminación

1.7. Super enrolamiento de nuevas cadenas.

2. Microtubos

2.1. Para llevar a cabo PCR se necesita:

2.2. ADN Molde

2.3. ADN Polimerasa

2.4. dATP, dGTP, dCTP, dTTP

2.5. Solución amortiguadora

2.6. Co-factor de polimerasa(Mg)

2.7. Iniciadores

3. Recomendaciones

3.1. Utilizar un control negativo (sin ADN molde)

3.2. Utilizar un control positivo

3.3. utilizar materiales estériles y nuevos

3.4. utilizar pipetas exclusivas para PCR

3.5. Mantener los reactivos en hielo porque son sensibles a tempreatura

3.6. De preferencia no mas de 40 ciclos

4. Ventajas y Desventajas

4.1. permite generar millones de copias de regiones de interes

4.2. Estandarización de la tecnica para organismo (Tardado y costoso)

5. Historia

5.1. Gobind Khorana (1971)

5.2. Kary Mullis y sus compañeros (1983)

5.3. Taq polimerasa (1976) sustituto de ADN polimerasa resistente a altas temperaturas

6. PCR

6.1. Desnaturalizacion por calentamiento 94-96 °C

6.2. Bajar temperatura 40-60 °C para alinear iniciadores

6.3. Sintesis de nueva cadena sentido 5'-3' a temperatura 72 °C

6.4. Repetir

7. Equipo

7.1. Termociclador

7.2. Vortex

7.3. Micropipetas de 2, 20, 100 y 200 uL

7.4. Microcentrífuga

7.5. Fotodocumentador

8. Aplicaiones

8.1. Simplification de técnicas moleculares

8.2. Secuenciacion genetica (lectura del genoma humano)

9. Wendy Gutiérrez