Long PCR

1. Componentes

1.1. ADN Molde

1.2. Buffer

1.2.1. 50 mM Tris

1.2.2. 16 mM Sulfato de amonio

1.3. Enzimas

1.3.1. Taq polimerasa

1.3.2. Pwo polimerasa

1.4. dNTPs

1.5. Cebadores

1.6. Cofactor

2. Ventajas

2.1. Incorpora una polimerasa adicional con actividad exonucleasa termoestable

2.1.1. Aumenta la probabilidad de encontrar un ADN específico cuando se mezcla con otro material genético

2.1.2. Reduce la probabilidad de falsos negativos

2.1.3. Corrige errores más fácilmente

3. Estudio

3.1. Presencia de simbionte intracelular

3.1.1. Walbachia sp.

4. ¿Cuándo utilizarla?

4.1. Amplificaciones en las que la PCR estándar genera falsos negativos.

4.2. Cuando se requiera más exactitud y sensibilidad en los resultados

5. Ciclos

5.1. 36

5.1.1. Desnaturalización inicial

5.1.1.1. 94 °C

5.1.1.2. 2 min

5.1.2. Desnaturalización entre ciclos

5.1.2.1. 94 °C

5.1.2.2. 10 s

5.1.3. Alineamiento

5.1.3.1. 59 °C

5.1.3.2. 30 s

5.1.4. Extensión

5.1.4.1. 68 °C

5.1.4.2. 1 min

5.1.5. Ciclos 11 y 36

5.1.5.1. Extensión

5.1.5.2. + 20 s