1. Es una técnica para determinar la masa de las moléculas.
1.1. Una molécula se fragmenta en diferentes iones cuyas masas se miden con precisión
1.2. Los iones generan un espectro de picos únicos que determinan la identidad de la molécula original.
1.2.1. Los iones viajan a través del tubo a diferentes velocidades debido a un campo magnético que hace que los iones sigan una trayectoria curva dentro del tubo
1.2.2. Las curvas eliminan los iones que son demasiado pequeños o demasiado grandes.
1.3. Los iones en el rango de tamaño correcto son desviados por el campo magnético alrededorambas curvas para golpear el colector, donde se registran como picos en el espectro de masas.
1.4. El pico base es el más intenso, y otros picos se miden en relación con el pico base.
1.4.1. Cada pico se representa en función de la relación masa / carga (m / z).
2. Ambas técnicas pueden identificar la proteína por su patrón de fragmentación, y las técnicas pueden identificar cualquier modificación, como la fosforilación y la glicosilación.
3. Dos técnicas de ionización diferentes
3.1. MALDI o ionización por desorción láser asistida por matriz
3.1.1. Incorpora péptidos en una matriz sólida antes de la ionización
3.1.2. Los péptidos están incrustados en un material que absorbe la luz láser
3.1.3. La matriz absorbe y transfiere la energía del láser a los péptidos, haciendo que liberen diferentes iones
3.1.4. Los iones se aceleran a través de un tubo de vacío mediante una rejilla cargada
3.1.5. En el otro extremo, el tiempo de vuelo (TOF)
3.1.6. El detector registra la intensidad y calcula la masa
3.1.7. En el medio hay un tubo de vuelo libre de campos eléctricos. Los iones se aceleran con elmisma energía cinética, y cuando alcanzan el tubo de vuelo, los iones más ligeros se mueven más rápido que los iones más pesados.
3.1.7.1. El tiempo de vuelo es proporcional a la raíz cuadrada de la relación masa / carga (m / z).
3.2. La ionización por electropulverización
3.2.1. Los péptidos se disuelven en líquido y se liberan gotas muy pequeñas de un tubo capilar estrecho.
3.2.2. Las gotas entran al campo electrostático, donde un gas calentado hace que el solvente se evapore y las gotas se rompan.
3.2.3. Esto hace que el péptido libere iones en el tubo de vacío, donde el campo eléctrico los acelera.
3.2.4. Se puede usar un detector TOF,
3.3. Otros detectores usan trampas de iones cuadrupolo o resonancia de ciclotrón de iones de transformada de Fourierpara determinar la masa de los iones.
4. El uso de la espectroscopía de masas será más frecuente a medida que mejore la metodología.
4.1. Tipos
4.2. Por desorción-ionización láser (SELDI) con superficie mejorada
4.2.1. Toma muestras líquidas e ioniza los péptidos que se adhieren a un metal tratado.
4.2.2. Muestra una gran promesa para los fluidos corporales como la sangre
4.2.3. Ayudará a identificar un perfil de proteína particular para diferentes estados de enfermedad.
4.3. Otra mejora para que MALDI caracterice las muestras de proteínas es una técnica llamada :
4.3.1. técnica de identificación de proteínas multidimensional (MuDPIT)
4.3.1.1. una mezcla más compleja de proteínas puede fragmentarse en péptidos y luego identificarse por espectroscopía de masas.
4.4. La espectroscopía de masas tradicional
4.4.1. tiene un número limitado de proteínas diferentes que se pueden identificar.
4.5. espectroscopía de masas en tándem
4.5.1. san dos rondas de espectroscopía de masas.
4.5.1.1. porque se produce un ion en la primera ronda de espectroscopía de masas
4.5.1.2. ese ion se fragmenta por colisión con un gas
5. Cuantificación de proteínas mediante espectrometría de masas
5.1. también se puede usar para cuantificar un péptido particular de una proteína, que se correlaciona directamente con la cantidad de proteína
5.2. técnica llamada Etiquetado de isótopos estables por aminoácidos en cultivo celular (SILAC)
5.2.1. os investigadores cultivan muestras de células con y sin aminoácidos marcados con un isótopo estable
6. Preparación de proteínas para espectroscopia de masas
6.1. Deben obtener una muestra pura de la proteína cortando una mancha de un gel bidimensional o mediante purificación por HPLC
6.1.1. las proteínas se tratan con agentes reductores para romper cualquier puente disulfuro
6.1.1.1. luego se digiere en fragmentos usando una proteasa, que corta las proteínas en el lado carboxiterminal de la arginina.y lisina