1. Microfluidos
1.1. Hay ensayos que emplean el uso de la nanotecnologia para mejorar el rendimiento usando una cantidad mínima de muestras y reactivos
1.1.1. Tang et al, midiendo los cambios de pH puede detectar el cambio metabólico y por tanto el crecimiento bacteriano en 3h
1.1.2. Choi et al, utiliza un sitema de microfluidos con camaras de cultivo que contienen agarosa , donde se inmobiliza las bacteris y se ve el crecimiento bacteriano en 3-4h
1.1.3. Mach et al,realiza un antibiograma en 3-4 h, a partrir de micromuestras de orina usando un sensor que cuantifica ARNr 16s
2. Quimioluminiscencia
2.1. Fundamento
2.1.1. Medida de niveles de ATP bacteriano de origen intracelular, extracelular o total.
2.1.2. Calcular CIM
2.1.2.1. Comparación de señal ATP de grupo control (No antibiótico) con Señales emitidas de microorganismos incubados con antibióticos.
2.1.3. Duracion: 4 horas
2.2. Determinación de sensibilidad mediante adenilato quinasa.
2.2.1. Se añade adenosin difosfato a los cultivos bacterianos con y sin antibotico por 6 horas.
2.2.2. ADP se transfroma en ATP por medio de enzima adenilato quinasa.
2.2.3. Se mide la señal de ATP, si la cepa es sensible la señal sera menor.
2.3. Quimioluminiscencia
2.3.1. Agregar menadiona al cultivo
2.3.1.1. Prescindir de rotura celular.
3. Microarrays
3.1. Utilización de sondas (ADN) marcadas
3.2. Muestras para analizar se incuban con sonda para hibridarse
3.2.1. Herramientas informaticas, detectar variaciones en secuencias.
3.3. Estudio de sensibilidad
3.3.1. Detección de genes de resistencia
3.3.2. Bacterias gramnegativas, detectar genes que codifican B-lactamasas
4. Métodos de lisis bacteriana
4.1. La bacteria es incubada con la presencia del antibiótico.
4.2. La bacteria se inmoviliza en un microgel de agarosa y es expuesta a una solución de lisis que produce la liberación del ADN
4.3. Incubación con el fluorocromo SYBR Gold
4.4. Observación al microscopio de fluorescencia es posible estudiar la integridad del ADN
4.5. Duración: 2 Horas
4.5.1. Bacterias gramnegativas como grampositivas
5. Métodos comerciales
5.1. Fundamento
5.1.1. uso de tiras comerciales junto con un gradiente AB
5.1.1.1. Se usan en muestras respiratorias
5.1.1.2. se siembran en placas de Mueller Hinton
5.1.1.2.1. deposito de las tiran en AB
5.1.1.2.2. Incubación de las placas por 24h
5.2. Resultados
5.2.1. Deben clasificarse de acuerdo a
5.2.1.1. FDA
5.2.1.1.1. Como agreements, minor errors, major errors and very major errors
5.2.2. Gold standart
5.2.2.1. Resultados de microdilución en
5.2.2.1.1. Caldo
5.3. identificación bacteriana y obtención del antibiograma a partir del frasco de hemocultivo crecido
5.4. Frascos de hemocultivo crecido
5.4.1. VITEK 2
5.4.1.1. Enterobacterias,
5.4.1.2. Pseudomonas
5.4.1.3. aeruginosa
5.4.1.4. bacilos gram -
5.4.2. Phoenix
5.4.2.1. gram +
5.4.3. MicroScan Phoenix
5.4.3.1. cocos gram +
5.4.4. MALDI-TOF, Phoenix
5.4.4.1. Bacilos gram -
6. Técnicas moleculares
7. Frasco de hemocultivo crecido
7.1. importante pata la detección de Staphylococcus aures y su resistencia a la meticilina en menos de 1h
8. PCR
8.1. Otorga un gran numero de copias de la secuencia de ADN a estudiar y por lo tanto una alta sensibilidad
8.2. Útil en detección de genes de resistencia y por tanto la velocidad de reproducción del microorganismo
9. Métodos colorimétricos
9.1. Fundamento
9.1.1. Añadir resazurina al cultivo bacteriano en medio liquido del antibiótico con que es incubado.
9.1.1.1. Si es resistente la resazurina es reducida por la actividad metabólica de la bacteria. (Color azul)
9.1.1.2. Si es sensible la resazurina permanece en su forma oxidada (Color rojo)
9.1.2. Incubar la bacteria en presencia de iones NO3 y antibiotico
9.1.2.1. Si la bacteria es resistente al antibiótico se generan iones NO2 que con reactivo de Gries originan color rojo.
9.2. Se ha utilizado para identificar la sensibilidad de S. aureus a meticilina y vancomicina.
10. citometria de flujo
10.1. fundamento
10.1.1. Método de laboratorio donde las células son teñidas con un tinte sensible a la luz, se sumergen en un líquido y luego estas células pasan por un haz de luz con una intensidad de 500-4000 partículas
10.2. resultados
10.2.1. Los resultados obtenidos son sensibles, reproducibles y comparables con los obtenidos por el método de macrodilución en caldo.
10.2.2. Este método determinar
10.2.2.1. el número de células,
10.2.2.2. el porcentaje de células vivas
10.2.2.3. identifica marcadores tumorales y antígenos en la superficie celular
10.3. Objetivo
10.3.1. caracterizar, separar y cuantificar las diferentes subpoblaciones celulares
11. Nefelometría
11.1. Fundamento
11.1.1. al detectar microorganismos en un tubo con un medio de enriquecimiento se desvía la luz y está es recibida en unos detectores que codifican las señales mediante el uso de un software para su posterior lectura.
11.2. Resultados
11.2.1. concentración microbiana muestra
11.2.2. detección fenotípica de mecanismos de resistencia de cepas
11.2.3. 24 h gram +
11.2.4. 8 h gram -
11.3. mide la dispersión de la luz y por ello es método rápido
11.4. en las muestras de orina es un antibiograma directo
12. Espectrometria de masas
12.1. MALDI-TOF, es una herramienta que permite la identificación y diferenciación de bacterias , levaduras y hongos
12.1.1. procedimiento
12.1.1.1. primero es necesario ionizar los microorganismos, luego se introduce la muestra en una cámara de vacio donde sera irradiada por una luz ultravioleta y luego se aplica unas cargas electrmagneticas que permitan separar los iones de las proteínas
12.1.2. ventajas
12.1.2.1. este sistema permite a partir de lo que se conoce como huella peptidica la identificación de microorganismos , pero también como parte de antibiograma permite observar si estos microorganismos poseen enzimas que degraden los antibioticos
12.1.2.2. asi mismo es posiblever la resistencia a cloranfenicol y clindamicina mediante la deteccion del ARN 16s