Métodos de cuantificación de proteínas en solución

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Métodos de cuantificación de proteínas en solución by Mind Map: Métodos de cuantificación de proteínas en solución

1. Importancia

1.1. Estimar concentración de proteínas

1.2. Se basa en

1.2.1. Propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz UV

1.2.2. Capacidad de formar derivados químicos

1.2.3. Capacidad para  unir ciertos colorantes

1.2.4. Criterios para escoger un método

1.2.4.1. Cantidad total de la proteína presente en la muestra

1.2.4.2. Concentración de las proteínas

1.2.4.3. Especificidad del método

1.2.4.4. Presencia de otros sustratos que podrían interferir

1.2.4.5. Facilidad y reproducibilidad del método

2. Método de Bradford

2.1. Principio

2.1.1. Se basa en la unión del colorante Coomassie Blue G-250 a la proteína. Requiere curva estándar

2.2. Sensibilidad: 1-15 ug

2.3. Detección a 595 nm

2.4. Ventajas:

2.4.1. Sensible, barato y rápido

2.4.2. Pocas interferencias con otros sustratos, cuando estas ocurren pueden arreglarse adicionando un buffer

2.4.3. El método más usado

2.4.4. Intensidad de color es proporcional a la concentración de proteína

2.5. Desventajas

2.5.1. las soluciones básicas y los detergentes interfieren en el método

2.5.2. Complejo colorante- proteína dura sólo una hora

3. Método Lowry

3.1. Principio

3.1.1. El Cu+2  es reducido a Cu en presencia de pH alcalino, la reacción de Biuret quela estos iones, mientras el reactivo de Folin potencia el color azul. Requiere curva estándar

3.2. Sensibilidad: 10 mg de proteína

3.3. Detección a 750 nm

3.4. Ventajas

3.4.1. relativamente sencilla

3.4.2. fácil de adaptar a análisis de pequeña escala

3.5. Desventajas

3.5.1. Procedimiento lento y destructuvo

3.5.2. No compatible con detergentes o agentes reductores

3.5.3. Variación de resultados según proteína

3.5.4. El color no es proporcionar a la concentración de la proteína

4. Ensayo Nano Orange

4.1. Principio

4.1.1. Cuantificación por fluorescencia. El reactivo se une a detergentes en la superficie de las proteínas, así como a sus regiones hidrofóbicas, el colorante que no reaccione con el reactivo no presentará fluorescencia

4.2. Sensibilidad de 10 ng/ml a 10 ug/ml

4.3. Detección a 485/590 nm

4.4. Ventajas

4.4.1. Alta sensibilidad

4.4.2. Variación mínima entre proteínas

4.4.3. Ensayo rápido

4.4.4. Compatible con agentes reductores

4.4.5. cuantificación puede hacerse hasta 6 horas después de ensayo

4.5. Desventajas

4.5.1. Costo

5. Método BCA

5.1. Principio

5.1.1. El Cu+2 es reducido a Cu en un pH básico, el BCA quela los iones Cu formando complejos color morado

5.2. Sensibilidad: 0.5-30 mg/ml

5.3. Detección a 562 nm

5.4. Ventajas

5.4.1. No se presentan interferencias por concentraciones altas (1%) de detergentes

5.4.2. Menos interferencias que en método Lowry

5.5. Desventajas

5.5.1. El color no es tan estable, por lo que es importante controlar el tiempo

5.5.2. cualquier solución que cambie el pH a menor a 11 o mayor a 11.5 interfiere con el método

6. Fluorescamina

6.1. Principio

6.1.1. Reacciona con grupos amino primarios.Colorante no reaccionante no presenta fluorescencia

6.2. Sensibilidad de 0.3ug/ml a 13 ug/ml

6.3. Detección a 390/475 nm

6.4. Ventajas

6.4.1. Método sensible

6.4.2. Fácil

6.5. Desventajas

6.5.1. Sensibilidad dependiente de número de aminas presentes

6.5.2. Reacciona con otras aminas primarias

6.5.3. No compatible con buffer que contenga Tris o glicerina

6.5.4. Reactivo inestable

7. OPA (oftaldehído)

7.1. Principio

7.1.1. Reacciona con grupos amino primarios en presencia de Beta-mercaptoetanol. Colorante no reaccionante no presenta fluorescencia

7.2. Sensibilidad 0.2ug/ml a 25ug/ml

7.3. Detección 340/455 nm

7.4. Ventajas

7.4.1. Bajo costo

7.5. Desventajas

7.5.1. Sensibilidad dependiente de número de aminas presentes

7.5.2. No compatible con buffer que contenga Tris o glicerina

8. Absorción UV

8.1. Principio:

8.1.1. Absorción del enlace petídico. Absorción de tirosina y triptofano.

8.2. Sensibilidad de 10ug/ml a 2mg/ml

8.3. Detección a 205-280 nm

8.4. Ventajas

8.4.1. No es destructivo

8.4.2. Bajo costo

8.5. Desventajas

8.5.1. La sensibilidad depende de cantidad de aminoácidos armáticos presentes