1. Parte I Pruebas para el análisis de aldehídos y cetonas
1.1. 1. Formación de fenilhidrazonas
1.1.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que va analizar y márquelo con el nombre de la misma. 2. Luego adicione 0,5mL (si la muestra es líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar (si la muestra es sólida). 3. Adicione a cada tubo 0,5mL de solución de 2,4 dinitro-fenilhidracina. 4. Agite fuertemente, registre los tiempos de aparición de los correspondientes precipitados hasta un tiempo de máximo 10 minutos. La aparición de éste color es indicativa de la presencia de aldehídos y cetonas. 5. Igualmente registre los cambios, colores (amarillo, rojo, naranja) y otros aspectos que considere convenientes. 6. En el informe de laboratorio realice las reacciones correspondientes.
1.2. 2. Reacciones de oxidación (diferenciación entre aldehídos y cetonas)
1.2.1. a. Ensayo de Fehling 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar y márquelo con el nombre de la misma. 2. Luego adicione 0,5 ml (si la muestra está líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 3. Añada a cada tubo 0,5 ml de solución de Fehling A y luego 0,5 ml de solución de Fehling B. 4. Agite suavemente, coloque los baños en el baño de agua, durante unos tres minutos. 5. Un precipitado amarillo naranja de óxido cuproso es un ensayo positivo, es decir, una reacción de oxidación se llevó a cabo. Si se puede agregar un exceso de reactivo, puede aparecer una coloración verde que se toma también como positivo
1.2.2. segundo. Ensayo de Benedict 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que va analiza. 2. Luego adicione 0,5 ml (si la muestra está líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 3. Adicione 2mL del reactivo de Benedict. 4. Caliente en un baño de agua hirviendo por tres minutos. 5. Observe los resultados y regístrelos. Un cambio de coloración a color rojizo-cobre es indicativo de presencia de aldehído.
1.2.3. c. Ensayo de Tollens 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que va analizar. 2. Luego adicione 0,5mL (si la muestra es líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar (si la muestra es sólida). 3. Adicione 2mL del reactivo de Tollens, agite y deje reposar por 10 minutos. 4. La aparición de un espejo de plata o precipitado negro, es un resultado positivo. 5. Si luego de los 10 minutos, no ha ocurrido reacción alguna, puede calentar en baño maría a 35ºC por cinco minutos. No olvide controlar la temperatura para que no reaccionen las cetonas. 6. Registre sus datos.
1.3. 3. Detección de hidrógenos α (alfa) - Ensayo del haloformo
1.3.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que lo analice, adicione 0,5 ml, si la muestra es líquida; o una pequeña cantidad de la sustancia si es sólida. 2. Agregue 3 gotas de hidróxido de sodio al 10% y agite. 3. Luego dicione 8 gotas de la solución de yodo - yoduro de potasio 4. Observe los cambios. Un precipitado amarillo indica la presencia de yodoformo (ensayo positivo).
2. Parte II Carbohidratos
2.1. 1. Reacción de Molisch
2.1.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que lo analice, adicione 0,5 ml (si la muestra está líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 2. Agregue diez gotas de reactivo de Molisch. 3. Adicione 0,5mL de ácido sulfúrico concentrado, inclinando un poco el tubo de ensayo, y adicionando lemente por las paredes para que quede en la parte superior. Sin agitación. 4. El desarrollo de un anillo de color púrpura - violeta en la interfase se toma como positivo. (Ácido ácido sulfúrico concentrado para descomponer el carbohidrato a furfural o su derivado y reconocerlo con a - naftol en metanol y que forma un anillo de color púrpura - violeta)
2.2. 2. Reacción de Benedict
2.2.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que lo analice, adicione 0,5 ml (si la muestra está líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 2. Agregue 0,5mL de reactivo de Benedict. 3. Coloca el tubo en el baño maría durante tres minutos. 4. Un precipitado oscuro es positivo para carbohidratos reductores. (El reactivo contiene citrato de cobre en medio alcalino suave, al reaccionar con los azúcares reductores de un precipitado de óxido cuproso).
2.3. 3. Reacción del Lugol
2.3.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia que lo analice, adicione 0,5 ml (si la muestra está líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 2. Agregue 0,5mL de reactivo de Benedict. 3. Coloque el tubo en el baño maría durante tres minutos. 4. Un precipitado oscuro es positivo para carbohidratos reductores. (El reactivo contiene citrato de cobre en medio alcalino suave, al reaccionar con los azúcares reductores de un precipitado de óxido cuproso).
2.4. 4. Reacción de Barfoed
2.4.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5 ml (si la muestra es líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 2. Agregue 0,5 ml de reactivo de Barfoed. 3. Caliente el tubo en un baño maría. 4. Si se forma color precipitado en dos a siete minutos, la sustancia es un monosacarido. Después de siete minutos, el ensayo es positivo para los disacáridos. (Esta prueba permite diferenciar los monosacáridos de los disacáridos ya que los primeros se oxidan fácilmente. Como es un ensayo no específico, es necesario tener la certeza de las sustancias analizadas
2.5. 5. Reactivo de Bial
2.5.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5 ml (si la muestra es líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 2. Agregue 0,5mL de reactivo de Bial. 3. Caliente el tubo en un baño maría. 4. La aparición de un color o un precipitado verde en un ensayo positivo. 5. Registre sus resultados.
2.6. 6. Reactivo de Seliwanoff
2.6.1. 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5 ml (si la muestra es líquida) o una pequeña cantidad de la sustancia a analizar. 2. Agregue 0,5mL de reactivo de Seliwanoff. 3. Caliente la mezcla en un baño maría. 4. El desarrollo de un color rojo en dos minutos es prueba positiva para cetosas. Pasado ese tiempo, las aldosas dan una coloración más débil. (El ensayo utiliza la conversión de la cetosa a hidroximetil furfural y su condensación con resorcinol para formar compuestos coloreados)