1. Cad 3er año SSN EM Velazquez Flores Daniela M. Cad 3er año SSN EM Velázquez Reyes Lina Cad 3er año SSN EM Canseco Martinez Ximena Cad 3er año SSN EM Arriaga Santander Dariana
2. Preparación del paciente
2.1. Recomendaciones previas a la muestra
2.1.1. Suspender los medicamentos sistémicos o tópicos con acción antimicótica 15 días antes.
2.1.2. Cinco días antes debe evitarse la aplicación de cremas o polvos sobre la piel a estudiar.
2.1.3. En uñas no cortarlas en la semana anterior a la obtención, ni usar esmalte.
2.1.4. En pies uso de calzado cerrado.
2.2. Toma de muestra
2.2.1. Ida de la muestra deben limpiarse con etanol al 70 % la piel, pelos o uñas afectados.
2.2.2. Tomar la muestra utilizando contenedores estériles y enviarla antes de dos horas al laboratorio.
2.2.3. La toma de muestra debe realizarse de acuerdo al sitio y tipo de lesión.
3. Examen microscópico directo
3.1. Método facial y sencillo para detectar infecciones micóticas. Nos ayuda en el diagnóstico de ptiriasis versicblor
3.2. Se usan sustancias para la digestión de las proteínas, aclarar pigmentos y despegar las células queratinizadas; facilitan la observación de las estructuras fungías por su alto indice de refracción. Pueden haber falsos positivos si hay uso de antimicoticos tópicos, esmaltes de uña, etc.
3.3. Examen directo en fresco
3.3.1. Se usa KOH, que disuelve la queratina y digiere componentes proteicos pero no actúa sobre la pared celular, dejando los elementos fúngicos. Se puede añadir glicerol para prevenir degradación de elementos fúngicos
3.3.1.1. Solución 20% de KOH para uñas
3.3.1.2. Solución 10% de KOH para demás muestras
3.3.1.3. Se puede agregar dimetilsulfóxido que evita la necesidad del calentamiento, acelera la clarificación de la muestra
3.4. Se agregan tinciones que hacer más fácil analizar la muestra
3.4.1. Azul de metileno que tiene de azul las estructuras fúngicas
3.4.2. Tinta china o nigrosina que permite observar levaduras encapsuladas
3.4.3. El azul de lactofenol
3.4.4. Acido láctico y azul de algodón
4. Cultivo
4.1. Permite establecer género y especie, lo cual tiene importancia tanto epidemiológica, como en la selección del tratamiento.
4.2. Los medios más usados son el agar glucosado Sabouraud sin o con antimicrobianos como cloranfenicol y gentamicina para inhibir la contaminación bacteriana.
4.3. Para las micosis sistémicas el agar infusión cerebro - corazón es el medio indicado de siembra de la muestra.
4.4. Se incuban a temperaturas entre los 25-30 °C, temperatura de 37 °C debe reservarse para hongos dimórficos
4.5. Los dermatofitos crecen entre 7-28 días
4.6. Los hallazgos microscópicos los que en última instancia determinan su identificación en la mayoría de los casos.
5. Histopatología
5.1. Usado para confirmación y para diagnóstico en casos difíciles de identificación o aislamiento con los otros métodos.
5.2. Permite que se observe las causas de la lesión, la inflamación, cambios histopatológicos, respuesta inflamatoria.
5.3. La muestra se encuentra en formol al 10%
5.4. Se ocupan tensiones como hematoxilina-eosina, junto con el PAS y el Grocott o pata mentenamina, fontana-massson, mucicarmin
6. Serología
6.1. Detección del antígeno capsular de Cryptococcus neoformans por medio de aglutinación
6.2. Detección de galactomanano por la técnica de ELISA en pacientes con aspergilosis invasora.
6.2.1. Sensible que el látex y puede ser positiva desde antes de que aparezcan los síntomas clínicos
6.3. Para las formas de candidiasis invasora la detección de manano parece ser más sensible.
6.4. La detección de componentes no antigénicos liberados por los hongos durante la infección.
6.4.1. D-arabinitol, un metabolito producido en candidiasis invasora.
6.4.2. H-D-glucano producido por Candida spp, Aspergillus spp y Pneumocystis spp.
6.5. Métodos basados en medición de anticuerpos.
6.5.1. Respuestas retrasadas, reducidas o no existir en pacientes inmuno-comprometidos
7. Métodos de diagnóstico molecular
7.1. Biología molecular
7.1.1. Métodos de amplificación de señal y (PCR)
7.2. Tecnologías basadas en la proteómica
7.2.1. Electroforesis y otros como los microarreglos de proteínas
7.3. Otras técnicas moleculares
7.3.1. Amplificación de genes específicos por reacción en cadena de polimerasa, amplificación de secuencias aleatorias, la amplificación de genes housekeeping y amplificación de secuencias repetidas de ADN