Técnicas de Biologia del Desarrollo

1. Hibridación in situ

1.1. Técnica de laboratorio que consiste en marcar una hebra sencilla de ARN o ADN denominada sonda.

1.2. Permite que se empareje con su secuencia complementaria en el ARN o el ADN presente en una muestra de tejido o de cromosomas.

1.3. La detección in situ permite visualizar de forma directa la ubicación espacial de secuencias específicas, lo cual es esencial para dilucidar la organización y función génica, debido a esto esta técnica es de gran importancia en diversos campos, entre los cuales se encuentra el diagnóstico de rearreglos cromosomales, la detección de infecciones virales y el análisis de la función génica durante el desarrollo embrionario.

1.4. Hibridación in situ

2. RNA-Seq

2.1. Es un tipo especial de secuenciación cuyo objetivo es ver los patrones de expresión de los genes.

2.2. En vez de leerse y secuenciarse todo el genoma u exoma, se centra en secuenciar el RNA mensajero (mRNA), que se traducirá a una secuencia de aminoácidos y dará como producto final una proteína.

2.3. En este tipo de análisis siempre se trabaja con dos grupos de muestras, unas muestras “problema” y unas “control”, con el fin de comparar los patrones de expresión entre unas y otras.

2.4. RNA-Seq

3. ChiP-Seq

3.1. La secuenciación de inmunoprecipitación de cromatina es un método que se utiliza para determinar la ubicación de los sitios de unión al ADN en el genoma de una proteína de interés particular.

3.2. En una primera fase se realiza la inmunoprecipitación de la cromatina para seleccionar las secuencias del ADN que presentan sitios de unión para una determinada proteína.

3.3. La segunda fase de la técnica del ChIP-seq realiza una secuenciación simultánea de los fragmentos obtenidos por inmunoprecipitación de la cromatina.

3.4. Los datos obtenidos de esta secuenciación se analizan mediante técnicas de bioinformática.

3.5. ChiP-Seq

4. Edición de genoma con CRISPR/CAS9

4.1. Es un tipo de ingeniería genética en la que se realiza la manipulación directa de una secuencia en el genoma donde el ADN de una célula es modificado ya sea eliminándolo, insertando o reemplazando alguna secuencia de interés en el genoma de un organismo.

4.2. La edición del genoma funciona a partir del uso de enzimas llamadas nucleasas las cuales cortan el genoma de una parte muy específica. Las nucleasas se componen de dos partes: parte de nucleasas que cortan el ADN y otra parte dirigida al ADN, la cual esta diseñada para guiar a las enzimas a una secuencia específica de ADN.

4.3. El sistema CRISPR tiene dos componentes independientes: la proteína Cas9 que actúa como tijera y un pequeño ARN guía que le dice a Cas9 dónde ejercer su acción. La diferencia que tiene este sistema radica en que programar un ARN es mucho más fácil que programar una proteína, razón por la cual es el método que goza de mayor prestigio en la actualidad.

4.4. Se pueden realizar ediciones de forma más rápida, especifica y eficaz.

4.5. Edición de genoma con CRISPR/CAS9

5. Sistema Gal4-UAS

5.1. Es un método bioquímico que se utiliza para estudiar la expresión y función génica en organismos como la mosca de la fruta . También se ha adaptado para estudiar las funciones de unión química del receptor in vitro en cultivo celular .

5.2. Permite separar los problemas de definir qué células expresan un gen o proteína y qué quiere hacer el experimentador con este conocimiento.

5.3. Se puede visualizar primero una clase de neuronas eligiendo una mosca de una línea GAL4 que exprese GAL4 en el conjunto deseado de neuronas y cruzándola con una línea indicadora que exprese GFP.

5.4. Sistema Gal4-UAS

6. Sistema Cre-Lox

6.1. Es una tecnología de recombinasa específica del sitio , que se utiliza para realizar deleciones , inserciones , translocaciones e inversiones.en sitios específicos del ADN de las células.

6.2. Permite que la modificación del ADN se dirija a un tipo de célula específico o se active mediante un estímulo externo específico. Se implementa tanto en sistemas eucariotas como procariotas.

6.3. El sistema de recombinación Cre-lox ha sido particularmente útil para ayudar a los neurocientíficos a estudiar el cerebro en el que los tipos de células complejas y los circuitos neuronales se unen para generar cognición y comportamientos.

6.4. Sistema Cre-Lox