1. Método de calentamiento con vapor.
1.1. Procedimiento:
1.1.1. depósito de base con agua destilada a temperatura ambiente
1.1.2. rejilla de base
1.1.3. cámara vaporizadora sobre rejilla
1.1.4. contenedor de incubación con 200 ml de buffer de recuperación antigénica
1.1.5. tapa de cámara de vaporizador
1.1.6. timer por 75 minutos, equilibrio entre baño y camara de incubación a 95 centígrados en 45 minutos
1.1.7. remover tapa de cámara y colocar láminas en el buffer ya precalentado
1.1.8. incubación 20-40 minutos
1.1.9. retirar de cámara vaporizadora el contenedor del buffer y las laminas
1.1.10. enfriar laminas por 20 minutos a temperatura ambiente
1.1.11. enjuague agua destilada, bloquear peroxidasa endógena y colocar laminas en agua destilada. enjuagar TBS o PBS. Continuar con la técnica de inmunohistoquímica.
2. Digestión Enzimática
2.1. el pretratamiento de cortes histológicos fijados en formalina e incluidos con enzimas proteolíticas mejorando la reactividad inmunohistoquimica.
2.2. Método de pretratamiento con tripsina
2.2.1. Cubrir cortes con tripsina. Incubación óptima a 37 grados, dependiendo el tiempo bajo formol con antígeno. Detener reacción con agua destilada, deteniendo reacción con agua destilada, bloquear peroxidasa endógena.
2.3. Pretratamiento con Pronasa
2.3.1. Cubrir con solución de trabajo, incubación óptima a 37 grados por 5 a 10 minutos, depende del antígeno en estudio. Detener la reacción con agua destilada, bloquear la peroxidasa endógena, colocar cortes en agua destilada. Se continua con técnica de inmunohistoquímica.
2.3.1.1. Detener la reacción con agua destilada, bloquear la peroxidasa endógena, colocar cortes en agua destilada. Se continua con técnica de inmunohistoquímica.
2.4. Método de pretratamiento con pepsina
2.4.1. Cubrir cortes con solución de pepsina precalentada a 37 grados por 10-30 minutos, incubación depende de la fijación, detener reacción con agua destilada. Bloquear peroxidasa endógena , cortes en agua destilada, continuar técnicas de inmunohistoquímica
3. Método de Microondas
3.1. Procedimiento:
3.1.1. colocar láminas en gradilla y rellenar espacios vacíos con láminas en blanco.
3.1.2. llenar recipiente con 200 ml de buffer de recuperación antigénica e introducir gradillas, cubrir evitando evaporación.
3.1.3. despues de segundo tratamiento, retirar contenedor del horno, mantener cortes en buffer a temperatura ambiente 15-20 minutos.
3.1.4. lavar agua destilada
3.1.5. bloquear peroxidasa endógena y colocar láminas en agua.
3.1.6. enjuagar TBS o BPS
3.1.7. técnica de inmunohistoquímica