1. Estudio
1.1. Material biologico y matriz biologica
1.1.1. Se emplearon como población de estudio a 12 Oryctolagus cuniculus L (conejos) albinos machos en su variedad Nueva Zelanda, seis en cada secuencia, homogéneos en edad, peso y clínicamente sanos muestreados de a cuerdo a criterios de inclusión y exclusión
1.2. Medicamentos en estudio, adquisición y productos a ensayar.
1.2.1. Las muestras estudiadas fueron de origen nacional, las cuales consistieron en:
1.2.1.1. · Test 25 frascos de suspensión de sulfametoxazol/trimetoprima multifuente de 200 mg: 40 mg/5 ml de Laboratorio Farmindustria asignado con la letra T1 para el lote 11070674, RS N° N-16499, fecha devencimiento 10-2017.
1.2.1.2. · Referencia 25 frascos de suspensión de Bactrim (sulfametoxazol/ trimetoprima) de 200 mg: 40mg/5 ml de Laboratorio Roche, asignado con la letra R para el lote RJ0774, RS N° EE-00549, fecha de vencimiento 12-2018.
1.2.1.3. Se solicitó a un Químico Farmacéutico ajeno al Laboratorio de Farmacología USMP, quien en forma confidencial, confeccionó el ciego, rotulando los frascos como producto A y producto B y anotó su decisión junto al nombre del producto, nombre del laboratorio fabricante, número de lote y fecha de expiración e informó su decisión en sobre sellado a nombre del investigador responsable; sobre que se abrió una vez terminado el estudio; ningún investigador, excepto el profesional mencionado, conoció la identidad de los productos hasta el final (2,19) del estudio .
1.3. inicio del procedimiento
1.3.1. Metodos.
1.3.1.1. En la presente investigación, se ha seguido el método modificado de la reacción de diazotación y posterior acoplamiento con el reactivo de Bratton-Marshall, es decir, el N-(1-Naftil) etilendiamina .
1.3.2. obtencion
1.3.2.1. obtención de la curva estándar de calibración
1.3.2.1.1. Se pesó 10 mg de sulfametoxazol estándar USP y se introdujo en una fiola, aforándola a 100 ml con agua destilada, obteniéndose una solución stock de concentración 0,1 mg/ml.
1.3.2.1.2. De la solución stock, se tomó 2 y 5 ml y se incorporaron a las fiolas marcadas como A y B; a una tercera fiola de 10 ml, marcada como C, se le adiciona 1 ml de solución stock. Alas tres fiolas se les incorporó 8 ml de ácido tricloroacético al 15%, e inmediatamente se aforó con agua destilada.
1.3.2.1.3. Se midió 10 ml de cada una de las soluciones anteriores y se colocó en tubos de vidrios de capacidad nominal de 20 ml marcados como A, B y C; luego se adicionaron los siguientes reactivos en el orden secuencial: 1 ml de solución de nitrito de sodio al 0,1%, después de 3 minutos de reposo se agregó 1ml de sulfamato de amonio al 0,5%, se dejó reposar por 2 minutos.
1.3.2.1.4. Después de ese tiempo, se agregó 1ml de solución de N-(1-naftil) etilendiamina. 2 HCl al 0.1%. Inmediatamente, se procedió a filtrar con papel de filtro 595.
1.3.3. Lecturas
1.3.3.1. A continuación, se realizó las lecturas en el espectrofotómetro UV/Vis 2550 Shimadzu, a una longitud de onda de 545 nm. Para ello, previamente se estandarizó con agua destilada.
1.3.4. Control de calidad biofarmaceutico
1.3.4.1. La prueba de contenido del fármaco se realizó preparando un pool de las suspensiones de sulfametoxazol/trimetoprima
1.3.4.2. Luego, se midió un volumen equivalente a 200 mg de sulfametoxazol, el mismo que se introdujo en una fiola, y se aforó a 1000 ml con agua destilada, obteniendo la solución stock.
1.3.4.3. De la solución stock, se tomó 2,5 ml y se llevó a una fiola de 100 ml, inmediatamente, se le incorporó 8 ml de ácido tricloroacético al 15% y se aforó a 100 ml con agua destilada.
1.3.4.4. Se midió 10 ml de las solución anterior (0,05 mg de sulfametoxazol) y se colocó en un tubo de vidrio de capacidad nominal de 20 ml; luego, se adicionaron los siguientes reactivos en el orden secuencial:
1.3.4.4.1. 1 ml de solución de nitrito de sodio al 0,1%; después de 3 minutos de reposo, se agregó 1 ml de sulfamato de amonio al 0,5%, dejando reposar por 2 minutos,
1.3.4.4.2. luego se agregó 1ml de solución de N-(1-naftil) etilendiamina. 2 HCl al 0,1%. Inmediatamente, se filtró con papel de filtro 595 (w-1).
1.3.4.5. A continuación, se procedió a realizar las lecturas en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 545 nm. Para ello previamente se estandarizó con agua destilada.
1.4. Diseño del estudio de la bioequivalencia
1.4.1. Los productos farmacéuticos se administraron a través de un diseño experimental aleatorio, cruzado comparativo y doble ciego .
1.4.2. Para evaluar la biodisponibilidad y establecer la bioequivalencia del sulfametoxazol, los 12 conejos albinos fueron divididos en dos grupos de 06 cada uno y marcados para distribuirlos de acuerdo al diseño de dos períodos:
1.4.2.1. En el primer período, se administró una secuencia de medicamento multifuente T1 y medicamento de referencia R (T1-R).
1.4.2.2. En el segundo período, se administró una secuencia de medicamento R y T1 (R-T1), dos tratamientos (T/R), cruzados, al azar, con una dosis única en cada (1,7) período, con 6 conejos albinos en cada secuencia
1.4.3. Las muestras de 2 ml de sangre se recolectaron en tubos de propileno, que contenían 100 μL de solución EDTA.
1.5. Recolección de la matriz biológica
1.5.1. Se extrajo 2 ml de sangre del seno venoso marginal (vena marginal) de la oreja de los conejos a los tiempos preestablecidos de 0,25; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 6,0; 8,0 y 12,0 horas de administrado la suspensión de sulfametoxazol.
1.5.2. El plasma se obtuvo mediante agitación suave del tubo y centrifugado a 2000 rpm por 10 minutos a temperatura ambiente.
1.6. Determinación cuantitativa del ingrediente farmacéutico activo en plasma
1.6.1. El plasma obtenido se adicionó en frascos de vidrio, con 15 ml de agua destilada; luego, se adicionó 4 ml de ácido tricloroacético al 15% a cada uno de los frascos identificados correctamente
1.6.2. Se dejó en reposo por espacio de 3 minutos, posteriormente, se filtró; tomando del filtrado 10 ml para introducirlo en tubos de vidrio de 20 ml, a los cuales se les adicionó, en forma secuencial:
1.6.2.1. 1 ml de solución de nitrito de sodio al 0,1%,
1.6.2.2. después de 3 minutos de reposo, se agregó 1 ml de sulfamato de amonio al 0,5%, dejándolo en reposo por 2 minutos.
1.6.2.3. Después de ese tiempo se agregó 1ml de solución de N-(1-naftil) etilendiamina. 2 HCl al 0,1%. Inmediatamente se filtró con papel de filtro 595.
1.6.3. El plasma tratado se mantuvo en congelación en una refrigeradora Bosch a -20o C hasta su análisis. Las lecturas se realizaron en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 545 nm. Para ello, previamente se estandarizó con agua destilada.
1.7. Resultados.
1.7.1. El medicamento multifuente (T1) y referente, ambos en suspensión de 200 mg de sulfametoxazol: 40 mg trimetoprima/5 ml, cumplen con todos los ensayos físicos y químicos, por lo tanto ambos productos son equivalentes farmacéuticos.
1.7.2. al querer anexar imágenes me pide cambiarme a modo premium, por lo tanto no podre poner tablas o graficas..
2. Definiciones:
2.1. Medicamento multifuente
2.1.1. Todos los equivalentes farmaceuticos distintos al innovador, tanto similares como genericos.
2.2. Medicamento innovador
2.2.1. Especialidad farmacéutica patentada, que ha sido autorizada por primera vez para su comercialización en base a la documentación de calidad, seguridad y eficacia.
2.3. Biodisponibilidad:
2.3.1. Medida de la cantidad de ingrediente farmaceutico activo que se absorbe a partir de un medicamento
2.4. Bioequivalencia
2.4.1. Ausencia de una diferencia significativa en la velocidad y cantidad del fármaco que se encuentra disponible en el sitio de acción, cuando se administran dos equivalentes farmacéuticos en las mismas dosis molecular.
2.5. Nombre genérico:
2.5.1. Denominacion aceptada por la OMS, con la cual se nombran los principios activos que llevan los medicamentos o copias originales.
2.6. Medicamento de referencia:
2.6.1. Medicamento innovador, con el cual el medicamento multifuente puede ser intercambiable.