1. Etapa analítica
1.1. Enriquecimiento de la muestra
1.1.1. Incubar las muestras homogeneizadas en BLEB a 30°C, durante 4 h.
1.1.2. Añadir asépticamente los tres agentes selectivos esterilizados por filtro para lograr concentraciones finales de 10 mg/L de acriflavina, 50 mg/L de cicloheximida y 40 mg/L de ácido nalidíxico sódico en los preenriquecimientos de BLEB
1.1.3. Incubar a 30 °C durante el resto del período de enriquecimiento de 24 a 48 h.
1.2. Aislamiento
1.2.1. A las 24 y 48 h, sembrar los enriquecimientos de BLEB en un agar Oxford e incubar durante 24h a 35°C
1.2.2. Seleccionar 5 colonias típicas y estriar en agar TSA-YE Incubar a 30ºC, 24 h – 48 h
1.3. Identificación
1.3.1. Metodología convencional
1.3.1.1. Reacción de catalasa (+)
1.3.1.2. Pruebas bioquimicas
1.3.1.3. Tincion de Gram (+)
1.3.1.4. Oxidasa (-)
1.3.1.5. Prueba CAMP
1.3.2. Metodología rápida
1.3.2.1. API® Listeria (bioMerieux, Durham, NC)
1.3.2.2. MICRO-ID™
1.3.2.3. PCR en tiempo real
1.4. Serotipificación
1.4.1. Difco™ Tipo 1 catálogo n.° 223031 y Tipo 4 catálogo n.° 22304
2. Estapa pre-analítica
2.1. Tomar al menos 100g de la muestra
2.2. Almacenar las muestras manteniendo las condiciones de almacenamiento originales y analizarlas lo más pronto posible
2.3. Almacenar las muestras manteniendo las condiciones de almacenamiento originales y analizarlas lo más pronto posible
2.4. Preparación de la muestra
2.4.1. Tomar 25 g al azar de cada unidad de muestra de 100 g.
2.4.2. Agregar 225 ml de caldo de enriquecimiento para Listeria tamponado (BLEB)
3. Etapa post-analítica
3.1. Interpretación de resultados
3.1.1. Indicar presencia o ausencia de Listeria monocytogenes en la cantidad de muestra analizada (por gramos o mililitros para muestras líquidas).