PROCEDIMIENTO (PCR)

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PROCEDIMIENTO (PCR) por Mind Map: PROCEDIMIENTO (PCR)

1. REACTIVOS Y MATERIAL

1.1. Reactivos

1.1.1. Látex anti-PCR

1.1.2. Suero control +

1.1.3. Suero control -

1.1.4. Diluyente Glicina Salina

1.2. Material

1.2.1. Cronómetro

1.2.2. Muestra de suero fresco

1.2.3. Placa de reacción

1.2.4. Pipetas desechables

2. OBTENCIÓN MUESTRA

2.1. ¿Cómo se hace?

2.1.1. 3.0mL de sangre

2.1.2. Centrifugar y separar suero

3. INTERPRETACIÓN

3.1. Negativo:

3.1.1. Suspensión homogénea

3.2. Positivo:

3.2.1. Aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos. Se califica de 1 a 4 +. Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible macroscópicamente. La concentración aproximada de PCR en la muestra puede ser calculada por la fórmula siguiente: PCR (mg/l) = Título x Sensibilidad de la reacción (6 mg/l) Ejemplo: la muestra presenta un título de 1:2. Su concentración de PCR es de 2 x 6 = 12 mg/l.

4. MÉTODO CUALITATIVO

4.1. Nota impoirtante:

4.1.1. Atemperar los reactivos y las muestras a Tª ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas

4.2. Paso a paso

4.2.1. 1. Agregar a un tubo de ensayo 95mL de Diluyente glicina-salina concentrado pH 8.2) diluido. 2. Añadir 0.05mL del suero problema. 3. Esperar 1:20 para que la dilución obtenida esté lista para usar. 4. En un círculo de la placa, depositar 0.05mL del suero diluido. 5. En otro círculo depositar una gota del suero de control +. 6. En un tercer círculo depositar una gota del suero de control -. 7. Añadir a cada uno de lo tres círculos una gota del Látex anti-Proteina <C> reactiva. 8. Mezclar manualmente la placa de reacción durante 2min. 9. Realizar la lectura del resultado bajo una luz directa.

5. MÉTODO SEMICUANTITATIVO

5.1. ¿Cómo proceder?

5.1.1. 1. Realizar diluciones sucesivas 1/2 de la muestra con solución salina (NaCL 9 g/L). 2. Proceder para cada dilución como en la prueba cualitativa