ELISA SANDUÍCHE

1. O QUE É ELISA?

1.1. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

1.2. Ensaio Imunoenzimático

1.3. Interação antígeno-anticorpo

1.4. Enzima + substrato = coloração

1.5. Sensibilidade e Especificidade

2. QUAL SUA UTILIZAÇÃO?

2.1. Deteccção de antígenos virais e de outros patógenos

2.2. Dosagem de hormônios

2.3. Marcadores tumorais e outras proteínas séricas

3. VANTAGENS & DESVANTAGENS

3.1. Alta sensibilidade

3.2. Seguro e versátil

3.3. Automatizável

3.4. Baixo limiar de detecção

3.5. Exige treinamento

3.6. Pequenas alterações de pipetagem, incubação ou reagentes pode gerar erros e resultados inespecíficos.

4. POR QUE SANDUÍCHE?

4.1. Antígeno fica entre dois anticorpos

4.1.1. Anticorpo de captura

4.1.2. Anticorpo de detecção (conjugado)

5. COMO ACONTECE?

5.1. Anticorpos de captura fixados na fase sólida

5.2. Adiciona-se a amostra que contém ou não o antígeno específico procurado. Caso tenha, este liga-se aos anticorpos fixados

5.2.1. A amostra pode ser:

5.2.1.1. soro

5.2.1.2. urina

5.2.1.3. outro líquido biológico

5.3. Incubação

5.4. Lavagem

5.5. Adiciona-se anticorpos conjugados com enzima que reconhecem o antígeno

5.5.1. Enzima: Peroxidase

5.6. Incubação

5.7. Lavagem

5.8. Adiciona-se o substrato que reage com a enzima e promove a mudança de cor ou fluorescência.

5.8.1. Substrato: H2O2 + cromógeno: TMB

5.8.2. A intensidade da reação/cor é proporcional à quantidade de antígeno presente.

5.9. Incubação

5.10. Solução de parada

5.10.1. solução ácida: HCl ou H2SO4

5.11. Leitura

5.11.1. A intensidade da coloração é lida por espectrofotometria.

5.11.2. Análise quantitativa