INMUNODIFUSIÓN RADIAL

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INMUNODIFUSIÓN RADIAL por Mind Map: INMUNODIFUSIÓN RADIAL

1. La prestación de complejos antígeno anticuerpo se coloca en un medio gelosado para cuantificar proteínas plasmáticas en una muestra biológica.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

2.1. Se inyecta aptoglobina a un animal Y se obtiene un suero con anticuerpos policlonales específicos dirigidos al antígeno

2.1.1. Los anticuerpos se colocan en agarosa líquida Qué posteriormente se solidifica

2.1.1.1. Se forman posos en la agarosa y se depositan 5mcL de calibradores de concentración conocida de aptoglobina humana Para realizar una curva estándar En otro poso se coloca una 5mcL de muestras incógnitas

2.1.1.1.1. Durante la incubación los antígenos en solución se difunden radialmente hacia fuera del pocillo Hasta que hayan antígenos y anticuerpos en la misma proporción y se forman los complejos antígeno anticuerpo

3. PRINCIPIO DE INMUNODIFUSIÓN RADIAL

3.1. Hay una relación cuantitativa entre la cantidad de antígenos presentes en la muestra y el diámetro del anillo de precipitación

3.1.1. Se realiza una curva de calibración Con el diámetro2 de los anillos de precipitación y la concentración de los calibradores

3.1.1.1. Se interpolan los diámetros de los pozos a evaluar

3.1.1.1.1. Nuevo Tema

4. OBSERVACIONES EN LABORATORIO

4.1. Las placas se conservan en heladera de 2 a 8°C Las placas de agar no se deben congelar No colocar al fondo y siempre en posición horizontal e invertidas No usar agares congelados, pocillos condensados No usar sueros lipemicos, hemolizados o con partículas en suspensión Para llenar los pocillos se deben usar pipetas y usar la técnica de pipeteado reverso y no se deben tocar las paredes de los pocillos

4.1.1. Al terminar la siembra, se coloca un algodón húmedo en el centro Se incuba a temperatura ambiente, según tiempo indicado y en cámara húmeda No cambiar las temperaturas abruptamente

4.1.1.1. Para la lectura se utiliza una lupa graduada o una regla de lectura